水稻osvdac基因RNAi載體的構建及其在轉基因植株中的表達分析.pdf

1、電壓依賴性陰離子通道(voltage-dependentanionchannel,VDAC)廣泛存在于真菌、植物和動物中。VDAC主要在調節(jié)線粒體與細胞質之間物質運輸和能量調節(jié)以及在線粒體介導的細胞凋亡中具有重要作用。
　　在水稻基因組中,已發(fā)現(xiàn)至少有8個編碼VDAC的基因。本研究采用酶切酶連方法針對其中5個水稻osvdac基因(osvdac4、osvdac5、osvdac6、osvdac7和osvdac8)構建RNA干涉表達載體

2、,其中osvdac4和osvdac7干涉表達載體成功轉化水稻品種日本晴,獲得了轉基因陽性植株。以osvdac7基因下調的轉化植株為材料,利用熒光定量PCR分析技術,研究了osvdac7基因下調條件下,其它osvdac家族成員的表達水平變化。主要結果如下:
　　1.以pMCG161構建了5個水稻osvdac基因的9個RNA干涉表達載體,即osvdac4-5、osvdac4-3、osvdac5-5、osvdac5-3、osvdac6-

3、3、osvdac7-5、osvdac7-3、osvdac8-5和osvdac8-3。
　　2.用9個RNA干涉表達載體分別轉化水稻品種日本晴,只有osvdac4-3、osvdac7-5和osvdac7-3的遺傳轉化成功獲得了陽性轉基因植株。熒光定量PCR分析表明,其被干涉的相應基因均有不同程度的下調表達趨勢。
　　3.采用實時熒光定量PCR,分析了osvdac7基因下調的RNA干涉植株中8個osvdac基因表達水平的變化。結