森林革蜱(Dermacentor silvarum)抗凝血酶基因的克隆、表達(dá)及功能研究.pdf

1、蜱類體內(nèi)的抗凝血酶對蜱在生長發(fā)育過程中的吸血和血餐消化發(fā)揮著重要的作用。本研究通過對森林革蜱（Dermacentor silvarum）cDNA文庫的篩選，克隆得到了一條符合抗凝血酶特征的基因序列，命名為DS-AT。該序列全長616bp，開放閱讀框?yàn)?29bp，編碼142個(gè)氨基酸。經(jīng)信號肽在線預(yù)測分析，信號肽有16個(gè)氨基酸，成熟肽有126個(gè)氨基酸。功能結(jié)構(gòu)域分析顯示DS-AT包含兩個(gè)BPTI-like結(jié)構(gòu)域，屬于Kunitz家族。經(jīng)NC

2、BI Blast檢索發(fā)現(xiàn)森林革蜱抗凝血酶基因編碼蛋白與boophilin蛋白的同源性是89％，以boophilin抗凝血酶氨基酸序列為模板，構(gòu)建了DS-AT蛋白的三級結(jié)構(gòu)模型。各組織和發(fā)育各階段熒光定量分析表明，DS-AT主要在雌蜱和雄蜱中腸和唾液腺中表達(dá)，在若蜱、雌蜱和雄蜱中均有表達(dá)。通過原核表達(dá)，獲得了DS—AT重組蛋白，其分子量約為36 KDa，并對該重組蛋白進(jìn)行了抗凝血活性以及抑菌活性的檢測，結(jié)果表明DS-AT重組蛋白具有抑制凝