C型凝集素基因在仿刺參不同部位的表達(dá)模式及抗菌功能的初步分析.pdf

1、C型凝集素(CTLs)在仿刺參的非特異性免疫應(yīng)答過(guò)程中起重要的調(diào)節(jié)作用。當(dāng)仿刺參機(jī)體受到外來(lái)病原攻擊時(shí)，C型凝集素將起到很好的免疫防御作用。
　　 本論文首次采用基因克隆技術(shù)(RACE技術(shù))獲得了仿刺參C型凝集素基因(AJCTL)的cDNA全長(zhǎng)序列，并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析；采用原位雜交技術(shù)(ISH)探究了AJCTL基因在仿刺參體內(nèi)的表達(dá)部位；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(realtime-PCR)研究了AJCTL基因在革蘭氏陰

2、性、陽(yáng)性菌的刺激下在仿刺參體內(nèi)不同部位中的表達(dá)模式。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：1、仿刺參C型凝集素的基因cDNA全長(zhǎng)為710bp，將此基因命名為AJCTL。其中開(kāi)放閱讀框?yàn)?18bp，編碼205個(gè)氨基酸殘基，N末端帶有一個(gè)信號(hào)肽，C末端帶有一個(gè)CTLD結(jié)構(gòu)域。經(jīng)過(guò)計(jì)算，此蛋白分子量為22.5kD，等電點(diǎn)為5.59。根據(jù)此蛋白的特點(diǎn)，AJCTL蛋白屬于reg蛋白第七組Ca2+依賴型糖結(jié)合蛋白，特異性識(shí)別甘露糖配體。2、原位雜交結(jié)果顯示

3、，AJCTL在仿刺參的體壁、縱肌、腸壁和呼吸樹(shù)等組織均有分布，在腸壁組織中信號(hào)尤為強(qiáng)烈。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示AJCTL蛋白在成年仿刺參體內(nèi)主要分布在縱肌和腸壁當(dāng)中，在呼吸樹(shù)和體壁內(nèi)的表達(dá)相對(duì)較少。3、C型凝集素基因?qū)εc革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌均有應(yīng)答。并且利用鰻弧菌刺激12小時(shí)后，隨著菌液濃度的提升，AJCTL的表達(dá)量也逐步提高，以上結(jié)果可以初步說(shuō)明AJCTL參與了仿刺參的先天免疫應(yīng)答，對(duì)仿刺參機(jī)體起到重要的免疫防御作用。