RepSox誘導(dǎo)牛成纖維細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化的研究.pdf

1、已有研究證明，小分子化合物 RepSox可上調(diào)mESCs的BMP-3水平，促進(jìn)高效重編程。BMP-2、BMP-4具有誘導(dǎo)C3H10T1/2細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向，經(jīng)誘導(dǎo)可分化為成熟脂肪細(xì)胞的能力。本研究將成纖維細(xì)胞定向分化為脂肪細(xì)胞，可為脂肪組織工程種子細(xì)胞的獲得和研究，提供重要的實(shí)驗(yàn)參考。
　　實(shí)驗(yàn)應(yīng)用顯微觀察、分子生物學(xué)技術(shù)、流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)、免疫組織化學(xué)等手段，分析定向分化過(guò)程中 BMP通路啟動(dòng)情況，細(xì)胞處理前后的周期及凋亡現(xiàn)

2、象，增殖能力和細(xì)胞微絲骨架的變化情況，并首次從組蛋白修飾的角度研究細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向的過(guò)程。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）15μM RepSox處理荷斯坦牛成纖維細(xì)胞3d，BMP2、Smad1、Smad2、Smad4表達(dá)量相對(duì)最高，微絲骨架結(jié)構(gòu)調(diào)整，逐漸以長(zhǎng)線狀平行排列，可作為處理細(xì)胞條件；（2）處理組與對(duì)照組相比，細(xì)胞周期G0/G1期比例減少，S+G2/M期比例增加；染色體核型及細(xì)胞增殖能力正常；細(xì)胞H3S10磷酸化水平上升了95.6

3、％、S28減弱了26.3%、H3K9甲基化水平上升了74.7%、H3K27甲基化水平下降了47.4%、H3K9乙?；綔p弱了64.8%；（3）RepSox處理3d的細(xì)胞，更換含10%FBS+0.5 mM IBMX+10μg/ml胰島素+1.0μM地塞米松+200μM吲哚美辛的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液誘導(dǎo)14天，成功向脂肪細(xì)胞定向分化，BMP2、Smad1、Smad2、Smad4基因開始沉默。成脂誘導(dǎo)2d時(shí)表達(dá)422/aP2基因，細(xì)胞數(shù)量增加至Rep