凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)相關(guān)基因MLC和SEC61γ的克隆和表達(dá)分析.pdf

1、凡納濱對(duì)蝦作為我國(guó)重要的對(duì)蝦養(yǎng)殖品種，在我國(guó)對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)中扮演著重要角色，但隨著其養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，對(duì)蝦的孵化率和幼體成活率降低、抗病能力減弱、病害嚴(yán)重等問題日益凸顯出來(lái)。利用現(xiàn)代遺傳育種手段培育出具有優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀的養(yǎng)殖品種是解決上述問題的有效途徑，目前迫切需要進(jìn)行對(duì)蝦生長(zhǎng)性狀的分子機(jī)理的研究。
　　 本研究以凡納濱對(duì)蝦肌肉組織為材料，構(gòu)建了一個(gè)肌肉組織全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)，并隨機(jī)選取72個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序了分析。對(duì)文庫(kù)質(zhì)量結(jié)果分析，文庫(kù)初始庫(kù)

2、容為8.50×106 cfu，插入片段在500～4000 bp之間，大部分片段在1000 bp以上。對(duì)隨機(jī)選取的72個(gè)克隆送交測(cè)序，整理分析得到37條已有功能注釋的基因序列和18條未知蛋白的核苷酸序列。
　　 另外本實(shí)驗(yàn)將由已構(gòu)建的差減cDNA文庫(kù)中獲得的兩個(gè)生長(zhǎng)相關(guān)基因肌球蛋白輕鏈基因MLC和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白基因SEC61γ的兩條片段序列，通過(guò)對(duì)己構(gòu)建的全長(zhǎng)文庫(kù)進(jìn)行目的基因的篩選獲得了上述兩個(gè)基因的全長(zhǎng)序列。凡納濱對(duì)蝦ML

3、C基因的cDNA全長(zhǎng)序列包含一個(gè)462 bp的開放閱讀框，推測(cè)其編碼的蛋白質(zhì)含有153個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)其分子量為17.5 ku，等電點(diǎn)為4.67。運(yùn)用熒光定量PCR的方法對(duì)MLC基因在凡納濱對(duì)蝦中表達(dá)情況進(jìn)行研究，結(jié)果表明MLC基因在凡納濱對(duì)蝦的肌肉、心臟、眼柄等8個(gè)組織或器官中都有表達(dá)，其中在肌肉組織中表達(dá)量最高，而最低表達(dá)量是肝胰腺中；不同生長(zhǎng)期肌肉組織中，表達(dá)量最高是45 d日齡的對(duì)蝦，表達(dá)量最低是10d日齡。
　　 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)