胸膜肺炎放線桿菌flp操縱子的結(jié)構(gòu)與功能研究.pdf

1、豬傳染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia，PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)引起的豬呼吸道傳染病。該病分布廣泛，給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該菌的致病機(jī)理十分復(fù)雜，涉及到許多不同的毒力因子。細(xì)菌粘附于宿主細(xì)胞表面是該菌致病的至關(guān)重要的第一步，許多粘附因子已被證實(shí)與細(xì)菌的毒力相關(guān)。細(xì)菌菌毛作為一種粘附因子，已被報(bào)道存在于

2、許多細(xì)菌的表面，參與調(diào)節(jié)細(xì)菌與宿主細(xì)胞之間的粘附作用。Flp菌毛屬于Ⅳb菌毛，由tad基因簇編碼而成。為此，本論文從如下三方面研究了解APP的flp操縱子的結(jié)構(gòu)和功能：
　　 1.flp操縱子結(jié)構(gòu)多樣性
　　 Flp菌毛由flp操縱子編碼而成，在細(xì)菌粘附宿主的過(guò)程中起著非常重要的作用。在本研究中，將APP的13個(gè)血清型菌株的flp操縱子測(cè)序并進(jìn)行序列分析，通過(guò)掃描電鏡觀察各菌株菌毛的形成，并體外檢測(cè)不同菌株的粘附能力。血

3、清型1、4、5、7、12和13參考菌株具有完整的flp操縱子結(jié)構(gòu)，由14個(gè)基因(flp1-flp2-tadV-rcpCAB-tadZABCDEFG)組成。這些菌株能夠形成Flp菌毛，比不具有完整的flp操縱子的菌株粘附能力更強(qiáng)。血清型2、3、6、9和11參考菌株的flp操縱子從啟動(dòng)子區(qū)域起存在不同程度的缺失，血清型10和15參考菌株的flp1基因不完整。這些結(jié)果顯示了Flp菌毛可能參與了APP的粘附，APP不同菌株flp操縱子結(jié)構(gòu)多樣性

4、可能導(dǎo)致了其具備不同的毒力。
　　 2.flp1和tadD基因是Flp菌毛形成所必需的
　　 許多病原菌的致病性都與其菌毛的表達(dá)有關(guān)，F(xiàn)lp菌毛屬于b類Ⅳ型菌毛，由tad基因簇編碼而成。第一部分的研究證明了APP不同菌株flp操縱子結(jié)構(gòu)具有遺傳多樣性，F(xiàn)lp菌毛生成需要完整的flp操縱子。我們分別構(gòu)建了flp1和tadD基因缺失突變菌株來(lái)研究Flp菌毛在APP致病過(guò)程的作用。研究發(fā)現(xiàn)：與親本菌株及互補(bǔ)菌株比較，缺失突變株

5、不能生成菌毛，形成生物被膜能力、粘附宿主細(xì)胞能力、抵御巨噬細(xì)胞吞噬能力、粘附定殖能力和毒力均顯著減弱。結(jié)果表明Flp菌毛在APP的感染和致病過(guò)程中起著十分重要的作用；flp1和tadD基因是Flp菌毛生物合成所必需的；TadD蛋白的TPR區(qū)域是其蛋白與其它蛋白質(zhì)相互作用的重要功能域。
　　 3.Flp菌毛的裝配機(jī)制的初步研究
　　 目前對(duì)于Ⅳ型菌毛的裝配存在一些預(yù)測(cè)的模式，但還沒(méi)有更為精細(xì)的實(shí)驗(yàn)去驗(yàn)證這種猜想。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)