番木瓜WRKY轉錄因子的基因表達譜及其功能的初步研究.pdf

1、植物在面對大自然中各種生物脅迫和非生物脅迫時會采用多種機制來適應環(huán)境。在植物與自然的相互作用研究過程中，越來越多的學者開始關注植物體在基因水平上的調節(jié)作用。近幾年，有關轉錄因子的研究已逐漸成為當今植物基因組的一個熱點。WRKY轉錄因子在植物體中起著應答各種生物脅迫與非生物脅迫的重要調節(jié)作用，分離植物WRKY家族的不同成員并鑒定其功能是闡明植物抗逆分子機制的重要途徑。
　　 本研究首先利用SUPERFAMILY數據庫，得到推測的番

2、木瓜WRKY轉錄因子的氨基酸序列，借助Genebank數據庫資源建立了本地的番木瓜Genome和EST數據庫，從而利用tBlastn工具獲得了番木瓜45個WRKY轉錄因子的編碼序列。對其中13個WRKY基因進行脅迫誘導，利用熒光定量PCR技術檢測基因表達水平，選取其中一個表達差異明顯的WRKY基因進行初步的功能研究?，F主要獲得以下結果：
　　 1.在番木瓜中發(fā)現45個WRKY轉錄因子，獲得其推測的基因編碼序列，并將其分為4類。在

3、SUPERFAMILY數據庫中搜索得到56個WRKY結構域分布于50個蛋白質中，經過序列比對、除去冗余之后得到45個WRKY轉錄因子及氨基酸序列。借助已經完成測序的番木瓜基因組，利用tBlastn工具獲得了這45個番木瓜WRKY轉錄因子的編碼序列。根據所含WRKY結構域的個數和鋅指結構的類型，將其分為4類：第Ⅰ類含有6個，第Ⅱ類含有30個，第Ⅲ類含有7個，第Ⅳ類含有2個。
　　 2.通過水楊酸(SA)、低溫、干旱、創(chuàng)傷、病原侵染

4、等多種脅迫誘導，得到13個番木瓜WRKY轉錄因子的基因表達譜。利用熒光定量PCR技術，對脅迫處理后的番木瓜苗在轉錄水平進行分析，檢測其中13個WRKY轉錄因子的表達量變化。結果顯示，這13個番木瓜WRKY轉錄因子除evm.TU.supercontig_1.102(以下簡稱為TF1.102)外，其他轉錄WRKY因子受生物脅迫或非生物脅迫誘導表達，其中TF12.199，TF807.3，TF9.353個WRKY轉錄因子對5種處理都受誘導，說明

5、這13個WRKY轉錄因子中有12個或多或少在抗脅迫反應中起到了一定的調控作用。
　　 3.成功克隆得到一個番木瓜WRKY轉錄因子基因的全長編碼區(qū)。分析番木瓜WRKY轉錄因子的基因表達譜，選取其中一個表達差異明顯的WRKY基因TF8073進行RT-PCR克隆，得到了一個558bp的cDNA序列，經測序與蛋白質保守結構域分析，確定其為番木瓜WRKY轉錄因子家族的一員。
　　 4.利用農桿菌滲透法，將TF807.3在番木瓜葉片

6、中瞬時超表達，發(fā)現番木瓜抗病相關基因CpSGT1和CpRAR1表達水平明顯上調。通過構建植物超表達載體pCAMBIA3300-TF807.3，轉化到農桿菌GV3101中，構建農桿菌介導的番木瓜瞬時表達體系，分析TF8073超表達的番木瓜葉片中抗病相關基因SGT1和RAR1的表達差異。結果顯示，在農桿菌侵染3d后，TF8073在番木瓜葉片中得到超表達，SGT1和RAR1的表達量分別上調2.4倍和4.5倍，說明TF807.3參與到SGT1和