普通菜豆SSR標(biāo)記開發(fā)及抗炭疽病基因分子標(biāo)記定位.pdf

1、由菜豆炭疽菌(〔Colletotrichum lindemuthianum(Sacc.et Magn)Br.Cav〕)引起的菜豆炭疽病是世界菜豆生產(chǎn)中的最嚴(yán)重的病害之一。菜豆炭疽病屬種傳病害,致病菌變異性強(qiáng),已經(jīng)對(duì)熱帶,亞熱帶甚至溫帶等適宜真菌生長(zhǎng)的菜豆產(chǎn)區(qū)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。實(shí)踐證明,適宜的栽培措施和利用抗病品種是防治菜豆炭疽病最經(jīng)濟(jì)、有效、環(huán)保的方法。利用與抗病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記定位目標(biāo)基因是實(shí)現(xiàn)分子標(biāo)記輔助育種的關(guān)鍵。目前用于

2、菜豆研究的分子標(biāo)記主要有AFIP、RAPD、SSR、CAPs等,但標(biāo)記數(shù)量較少,遠(yuǎn)不能滿足標(biāo)記輔助選擇(MAS)的需要,需要開發(fā)更多簡(jiǎn)單、易用的DNA標(biāo)記。
　　 本論文選取國(guó)內(nèi)菜豆高抗炭疽病品種和高感炭疽病品種,配置雜交組合,并利用高抗菜豆品種紅蕓豆進(jìn)行基因組測(cè)序,分離獲得含SSR位點(diǎn)的DNA序列,利用軟件Batch premier設(shè)計(jì)了7389對(duì)SSR引物,選取1335對(duì)引物,用紅蕓豆和京豆兩個(gè)親本進(jìn)行多態(tài)性鑒定和定位。分析

3、紅蕓豆對(duì)炭疽菌81號(hào)小種的抗性遺傳特性,用分離群體分組分析法(BSA)和微衛(wèi)星標(biāo)記多態(tài)性對(duì)紅蕓豆中的抗炭疽病基因進(jìn)行分子標(biāo)記和定位。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 1.分別構(gòu)建雜交組合紅蕓豆×京豆、紅蕓豆×Michelite、精米豆×京豆和精米豆×Michelite F2分離群體,同時(shí)構(gòu)建雜交組合紅蕓豆×京豆的172個(gè)F2:3家系,為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。
　　 2.利用紅蕓豆和京豆兩個(gè)親本,對(duì)1335對(duì)基于菜豆基

4、因組測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)的SSR引物進(jìn)行多態(tài)性篩選,其中有119對(duì)引物在兩個(gè)親本之間表現(xiàn)了豐富的多態(tài)性,多態(tài)率達(dá)8.9％,其中有4個(gè)SSR標(biāo)記在抗感池中有多態(tài)性。
　　 3.利用組合紅蕓豆×京豆的F2群體,初步構(gòu)建了菜豆SSR標(biāo)記遺傳連鎖圖譜,圖譜長(zhǎng)度是2878.63cM,平均兩個(gè)標(biāo)記之間的距離是20.56 cM。
　　 4.紅蕓豆對(duì)菜豆炭疽病81號(hào)小種的抗性由一個(gè)顯性單基因控制。將該基因命名為Co-F2322。
　　

5、5.利用微衛(wèi)星標(biāo)記多態(tài)性及遺傳連鎖分析發(fā)現(xiàn),位于菜豆B1連鎖群上6個(gè)SSR標(biāo)記,即BMc32、C180、C871、C171、C16、Pvm98和2個(gè)CAPs標(biāo)記g1224、g683與抗炭疽病基因Co-F2322連鎖,遺傳距離分別為26.14、15.60、3.58、4.97、12.15、13.8、3.81和12.99cM。標(biāo)記與基因在染色體上的位置關(guān)系為BMc32-C180-g1224-Co-F2322—42871-C171-C16-g6