依普拉芬及1,25二羥維生素D3對雞胚脛骨成骨細胞增殖及鈣通道TRPV6表達的影響.pdf

1、新型上皮性鈣通道成員的TRPV5/TRPV6表現(xiàn)為對鈣離子具有高度選擇性，對鈣離子代謝及骨代謝有著非常重要的作用。近來研究表明，雌激素、1，25二羥維生素D3、PTH、飲食鈣和藥物都可調(diào)節(jié)TRPV5/TRPV6的表達。研究顯示，TRPV5主要存在于腎，TRPV6主要存在于小腸，兩者在骨組織主要存在于成骨細胞。目前，國外研究已證明在腎TRPV5、在小腸TRPV6通道通過鈣的重吸收作用調(diào)節(jié)正常細胞內(nèi)、外的鈣水平;已發(fā)現(xiàn)大鼠BMSCs來源的成

2、骨細胞誘導分化過程中TRPV5和TRPV6鈣離子通道的表達，與顱骨來源的成骨細胞內(nèi)TRPV5和TRPV6的表達情況一樣。但是，針對雞胚脛骨成骨細胞內(nèi)TRPV6的表達情況以及與骨質(zhì)疏松的關系的研究尚未見文獻報道。
　　 雞胚脛骨來源的成骨細胞為研究成骨細胞在骨形成中的作用提供了最佳的體外試驗模型。采用酶消化和組織塊移行生長相結合的方法獲取成骨細胞。應用倒置相差顯微鏡觀察、噻唑藍(MTT)比色法、堿性磷酸酶染色(ALP)、鈣化結節(jié)染

3、色、姬姆薩染色從形態(tài)學、生物學上對細胞進行鑒定。鑒定結果顯示，雞胚脛骨成骨細胞具有典型成骨細胞的形態(tài)特征、ALP活性等功能，符合細胞的生長特性，并可在體外發(fā)生鈣化。
　　 本試驗取雞胚脛骨來源的成骨細胞，進行植物雌激素依普拉芬或1，25二羥維生素D3的干預，應用MTT法、RT-PCR以及流式細胞儀技術檢測成骨細胞的增殖活性、成骨相關性細胞因子的表達和TRPV6的表達以及細胞內(nèi)鈣離子濃度。結果表明，依普拉芬和1，25二羥維生素D3

4、均可促進雞胚脛骨成骨細胞的增殖，并且增殖作用明顯(P＜0.05)，但當濃度分別增大到10-4 mol·L-1和10-8 mol·L-1時，成骨細胞的增殖開始受到抑制;依普拉芬和1，25二羥維生素D3均可顯著地促進細胞內(nèi)堿性磷酸酶的分泌(P＜0.05)，并且ALP mRNA的表達水平與細胞中堿性磷酸酶的分泌呈正相關。RT-PCR檢測顯示，依普拉芬在10-8mol·L-1時極顯著地促進TRPV6 mRNA的表達(P＜0.01)，在10-10

5、 mol·L-1和10-6 mol·L-1時出現(xiàn)顯著地促進(P＜0.05);而1，25二羥維生素D3在10-10mol·L-1和10-9mol·L-1時極顯著地抑制TRPV6 mRNA的表達(P＜0.01)，并且在濃度降低時出現(xiàn)促進趨勢。依普拉芬對PMCA1b mRNA的表達水平出現(xiàn)抑制作用，在10-6 mol·L-1時出現(xiàn)極顯著地抑制(P＜0.01)，10-10 mol·L-1和10-8 mol·L-1時出現(xiàn)顯著地抑制(P＜0.05)

6、;1，25二羥維生素D3對PMCA1b mRNA的表達水平?jīng)]有規(guī)律的變化趨勢，但在10-11mol·L-1時出現(xiàn)極顯著地促進(P＜0.01)，10-12 mol·L-1和10-10 mol·L-1時出現(xiàn)極顯著地抑制(P＜0.01)。依普拉芬在10-8 mol·L-1時極顯著地影響細胞內(nèi)鈣離子濃度(P＜0.01)，在10-10 mol·L-1和10-6mol·L-1時出現(xiàn)顯著地促進作用(P＜0.05);1，25二羥維生素D3在10-10m