花生組織培養(yǎng)及體細(xì)胞融合研究.pdf

1、花生（ArachishypogaeaL.）是我國重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物之一。但由于花生栽培種的遺傳基礎(chǔ)狹窄與貧乏，嚴(yán)重影響了其產(chǎn)量和品質(zhì)。而花生屬野生種種質(zhì)資源豐富，基因具有多樣性，且大部分具有栽培種所沒有的優(yōu)良品質(zhì)。但在常規(guī)條件下，花生栽培種與多數(shù)野生種雜交不親和，影響這些野生種的有效利用。體細(xì)胞雜交法能克服雜交不親和性，使野生種的利用成為可能。體細(xì)胞雜交法能否成功應(yīng)用依賴于高頻植株再生體系的建立。本論文首先以花生胚小葉為外植體，建

2、立了高頻率植株再生體系;以此體系為培養(yǎng)基礎(chǔ)初步建立了花生的胚性懸浮系，并對花生原生質(zhì)體分離、融合及培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究，結(jié)果如下:
　　 1.以不同類型19個花生品種成熟種子的胚小葉為外植體，進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)及植株再生研究。將外植體培養(yǎng)在添加1mg/LNAA和6mg/LBAP的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽。結(jié)果表明，所有的基因型在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上均能高頻率地形成叢生芽，且在花生栽培種的五大類型中，類型內(nèi)品種間的叢生芽誘導(dǎo)率和類型間品種平均叢生

3、芽誘導(dǎo)率均存在顯著差異（多粒型內(nèi)品種間無顯著差異）。
　　 將叢生芽外植體轉(zhuǎn)移到添加4mg/LBAP的培養(yǎng)基上，促使芽伸長進(jìn)一步再生植株，結(jié)果表明不同基因型品種和類型間品種的植株再生率均存在顯著差異。其中珍珠豆型植株的平均再生率最高;普通型次之;多粒型品種的平均植株再生率最低。
　　 2.以不同類型19個花生品種成熟種子的胚小葉為外植體，對體胚誘導(dǎo)及植株再生進(jìn)行了研究。體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加10mg/L2，4-D。培養(yǎng)4w

4、后統(tǒng)計結(jié)果表明，所有花生品種均能高頻形成體胚，但五大類型內(nèi)品種間和不同類型間體胚誘導(dǎo)率差異顯著，龍生型品種的平均體胚誘導(dǎo)率最高(80.39％)，中間型次之(77.16％)，這2個類型的平均體胚誘導(dǎo)率均顯著高于多粒型，而與珍珠豆型和普通型無顯著性差異。
　　 將形成體胚的外植體轉(zhuǎn)移到添加4mg/LBAP的培養(yǎng)基上，促使體胚萌發(fā)再生植株。結(jié)果表明不同花生品種的體胚萌發(fā)再生植株的頻率存在差異?；ㄉ宕箢愋烷g平均植株再生率，普通型、珍珠

5、豆型、中間型品種平均植株再生率均高于90％，顯著高于多粒型和龍生型，龍生型品種平均植株再生率也高于多粒型。，
　　 3.建立了胚性懸浮細(xì)胞系:將魯花14號和近緣野生種A.stenosperma的幼葉誘導(dǎo)的胚性愈傷組織懸浮于添加2mg/L2，4-D，0.4mg/LTDZ，5g/LPVP，1g/L檸檬酸，3％的蔗糖的MSB5液體培養(yǎng)基中，懸浮培養(yǎng)4w后可以形成胚性懸浮細(xì)胞系。
　　 4.對花生原生質(zhì)體的分離、融合及培養(yǎng)進(jìn)行了