小麥祖先種ω-醇蛋白基因的克隆與a-醇溶蛋白基因轉(zhuǎn)化小麥研究.pdf

1、為了研究α-醇溶蛋白基因功能及評(píng)估其對(duì)小麥品質(zhì)育種的價(jià)值，我們利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法將一個(gè)來(lái)自老芒麥(Elymus sibiricus)的α-醇溶蛋白基因轉(zhuǎn)入小麥，通過(guò)雙引物PCR篩選后，對(duì)初步獲得的22株T0代陽(yáng)性株系的后代進(jìn)行了分子鑒定、蛋白檢測(cè)和遺傳分析，分別獲得了2株山融3號(hào)和1株濟(jì)麥21的轉(zhuǎn)基因株系，為進(jìn)一步的通過(guò)測(cè)定面粉品質(zhì)特性鑒定其功能奠定了基礎(chǔ)。
　　 為挖掘用于品質(zhì)育種的新的ω-醇溶蛋白基因和深入了解小麥A、

2、D基因組祖先種中該類基因的組成、結(jié)構(gòu)和進(jìn)化，利用基因組PCR技術(shù)從烏拉爾圖小麥(Triticum urartu)、野生一粒小麥(Triticum boeoticum)、栽培一粒小麥(Triticum monococcum)和粗山羊草(Aegilops tauschii)中克隆了19個(gè)ARQ-/ARE-類型的ω-醇溶蛋白基因的編碼序列。這些ω-醇溶蛋白基因編碼序列長(zhǎng)度變化很大，最短的744 bp，最長(zhǎng)的1044 bp，它們分別對(duì)應(yīng)的推導(dǎo)的

3、成熟多肽含248和348個(gè)氨基酸。推導(dǎo)的多肽鏈一級(jí)結(jié)構(gòu)分為三個(gè)結(jié)構(gòu)域，分別是一個(gè)短的N-端保守序列和一個(gè)C-端保守序列以及一個(gè)長(zhǎng)的、多變的中部重復(fù)序列區(qū)。通過(guò)系統(tǒng)發(fā)生的進(jìn)化樹(shù)分析，我們發(fā)現(xiàn)來(lái)自A基因組祖先種的12個(gè)無(wú)編碼框內(nèi)終止密碼子序列(以下稱真基因)和其它來(lái)自普通小麥A基因組的6個(gè)序列可以分為三個(gè)分枝。分枝1中包含1個(gè)來(lái)源于野生一粒小麥的序列，2個(gè)來(lái)自栽培一粒小麥的序列，3個(gè)來(lái)自普通小麥A基因組的序列以及4個(gè)來(lái)自烏拉爾圖的序列。分枝

4、2中包含1個(gè)來(lái)源于野生一粒小麥的序列和4個(gè)栽培一粒小麥的序列。第3個(gè)分枝僅包含來(lái)自普通小麥A基因組的序列。在這些ω-醇溶蛋白真基因序列中，栽培一粒小麥的2個(gè)亞種含有3個(gè)兩兩同源的基因，其中1個(gè)是另外2個(gè)基因通過(guò)異常重組產(chǎn)生的嵌合基因。
　　 13個(gè)ω-醇溶蛋白真基因的編碼序列都不含有半胱氨酸殘基和甲硫氨酸殘基。與乳糜瀉疾病相關(guān)的抗原種類在野生一粒小麥和栽培一粒小麥ω-醇溶蛋白基因中比烏拉爾圖小麥中多。我們?cè)谡撐闹杏懻摿薃基因組小