抗犬瘟熱和犬細小病毒病二聯(lián)卵黃抗體的制備及其臨床治療效果觀察.pdf

1、犬瘟熱病毒(CDV)和犬細小病毒(CPV)均能引起犬的高度接觸性、致死性傳染病,是世界各地常見的犬只病毒性疾病。犬瘟熱常表現(xiàn)為雙相體溫升高、急性鼻卡他和隨后的支氣管炎、卡他性肺炎、嚴重胃腸炎和神經(jīng)癥狀；犬細小病毒病常表現(xiàn)為腸炎綜合征,少數(shù)呈現(xiàn)心肌炎綜合征。臨床上常用特異性的高免血清和單克隆抗體對犬瘟熱和犬細小病毒病進行防治,卵黃抗體較高免血清和單克隆抗體有生產(chǎn)成本低、操作簡便、可大量生產(chǎn)等優(yōu)點。目前有應(yīng)用卵黃抗體治療犬的報道,然而臨床上

2、應(yīng)用的卵黃抗體滴度較低,治療效果不太理想。本試驗試圖通過制備組織滅活苗免疫蛋雞,以提高卵黃抗體滴度,并進行臨床治療效果觀察,為以后卵黃抗體在犬病的治療上提供科學(xué)依據(jù)。
　　 試驗1:首先將本實驗室保存的CDV、CPV毒株作為毒種,分別接種于非洲綠猴腎細胞(Vero細胞)、貓腎細胞(F81細胞),進行病毒的培養(yǎng)擴增,當(dāng)80％以上細胞產(chǎn)生細胞病變效應(yīng)(CPE)后收集細胞及培養(yǎng)液；然后用所培養(yǎng)病毒對健康犬進行攻毒,使其出現(xiàn)臨床癥狀并死

3、亡后,取犬的內(nèi)臟進行勻漿、離心,最后按常規(guī)的甲醛法滅活組織勻漿液,以蜂膠為免疫佐劑,制備CDV/CPV二聯(lián)組織滅活苗。
　　 試驗2:將本試驗制備的犬瘟熱和犬細小病毒二聯(lián)組織滅活苗和二聯(lián)細胞毒滅活苗給正處于產(chǎn)蛋期的40周齡蛋雞分別進行免疫,然后對兩種方法所收集的雞蛋中的抗體進行效價的測定和對比,確定比較好的蛋雞免疫方法。試驗分為3組,每組10只蛋雞。A組:注射的疫苗為組織滅活苗；免疫方法為頸部、胸部、翼部和腿部多位點肌肉注射；免

4、疫時間:第1 d、第8 d、第22 d、第30 d。B組:免疫方法和免疫時間均和A組一致,不同的是注射的疫苗為細胞毒滅活苗。C組為對照組,注射生理鹽水,免疫方法和免疫時間均和A組一致。在第四次免疫后,每隔兩天收集雞蛋,直到第50 d。利用PEG6000二步沉淀法從收集的雞蛋中分離和提取卵黃抗體(IgY),然后采用體外病毒中和試驗和間接Elisa方法測定卵黃抗體的效價。試驗結(jié)果顯示:A組所得抗體的效價明顯高于B組,并且A組抗體達到峰值的所

5、需時間較B組短；試驗證明采用組織滅活苗制備卵黃抗體的方法比傳統(tǒng)的制備卵黃抗體的方法好。
　　 試驗3:首先把卵黃抗體做成口服膠囊型制劑；然后選取臨床上自然感染犬瘟熱的發(fā)病犬20條和自然感染犬細小病毒病的犬20條；把患有犬瘟熱的犬和患有犬細小病毒病的犬分別分成兩組:試驗組和對照組,每組10條犬;對照組按照常規(guī)的治療方法進行治療,試驗組按照常規(guī)治療方法進行治療的同時飼喂卵黃抗體膠囊；最后測定兩組犬的治愈率和治愈時間。試驗結(jié)果顯示:試