溶磷菌的篩選、溶磷條件優(yōu)化及對玉米的促生作用研究.pdf

1、施用溶磷菌是提高土壤中難溶性磷生物有效性的重要措施之一，為了使施入的溶磷菌在土壤中更好地發(fā)揮其活化難溶性磷、改善作物磷素營養(yǎng)狀況的作用，所篩選的溶磷菌就必須兼具利用多種形態(tài)難溶性磷的能力。本文采用改良的Pikovskaya培養(yǎng)基篩選兼具溶解Ca3（PO4）2、磷礦粉和卵磷脂等難溶性磷源的菌株，并通過液體搖瓶試驗(yàn)、生理生化特性和16S rDNA序列分析、盆栽試驗(yàn)、培養(yǎng)及溶磷條件優(yōu)化等，研究了其在NBRIP培養(yǎng)基中的溶磷效果、分類學(xué)地位、對

2、玉米的促生作用及溶磷相關(guān)因素的影響。獲得的主要結(jié)果如下：
　　 （1）從江蘇和安徽的5種石灰性土壤中共分離獲得16株溶磷菌，其中菌株P(guān)1對Ca3（PO4）2、磷礦粉和卵磷脂中磷的溶解效果最佳，溶磷量分別為674.5μg·mL-1、132.3μg·mL-1和33.0μg.mL-1。
　　 （2）經(jīng)過菌落及菌體形態(tài)特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析，初步鑒定菌株P(guān)1和P3分別為唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（Burkhold

3、eria gladioli）和乙酸鈣不動桿菌（Acinetobacter calcoaceticus）。根據(jù)pqqE和gabY基因序列設(shè)計(jì)引物，通過PCR擴(kuò)增菌株P(guān)1、P2、P3、P4和P5中pqqE和gabY基因片段，僅從菌株P(guān)3中擴(kuò)增到與Pseudomonas cepaciaE37（U10242.1）的溶磷相關(guān)基因gabY同源性為95％的基因片段，而其它菌株中未擴(kuò)增出該基因片段。
　　 （3）菌株P(guān)1和P3的最佳培養(yǎng)碳、氮源

4、分別是葡萄糖、谷氨酸和淀粉、蛋白胨，而菌株P(guān)1和P3的最佳溶磷碳氮源條件分別是葡萄糖、KNO3和葡萄糖、（NH4）SO4。在NBRIP液體培養(yǎng)的1～7 d內(nèi)，170rpm，30℃，菌株P(guān)1和P3培養(yǎng)液的pH值第1 d就分別下降至5.03和4.98，并且在后續(xù)培養(yǎng)中仍趨于保持該值。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，水溶性磷濃度呈增長趨勢，而菌體數(shù)量變化總體趨勢都是先下降，后上升，再下降，最后趨于穩(wěn)定。此外，加透析袋處理WSP濃度有所減低。
　　

5、 （4）盆栽試驗(yàn)中，5種溶磷菌微生物有機(jī)肥均可顯著促進(jìn)玉米生長，株高、葉長、葉寬和干重分別增加5.1％～33.8％、14.0～38.0％、17.7％～37.6％和31.7％～177.1％，植株全磷含量比對照增加41.6～366.6％。經(jīng)抗生素標(biāo)記的5株溶磷菌在盆栽試驗(yàn)中的定殖效果以菌株P(guān)4和P5優(yōu)于P1、P2和P3，而對玉米的促生作用卻以P1的效果最佳，P3次之，P4和P5效果較差。菌株P(guān)1和P3的發(fā)酵上清液可在一定程度上促進(jìn)玉米種子發(fā)