抗犬瘟熱病毒P1蛋白單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用.pdf

1、犬瘟熱（CD）是由犬瘟熱病毒（CDV）引起的一種危害犬的高度接觸性傳染病。該病感染性強(qiáng)，發(fā)病率高，極易繼發(fā)細(xì)菌、病毒感染或二次感染。雖然犬瘟熱弱毒疫苗已廣泛應(yīng)用，但是隨著CD宿主范圍的不斷擴(kuò)大，疫苗株毒力的增強(qiáng)，以及新的強(qiáng)毒株的不斷涌現(xiàn)，該病已成為危害犬、毛皮經(jīng)濟(jì)動(dòng)物及野生動(dòng)物的重大疫病之一。因此，及時(shí)對(duì)CD病畜做出確切的診斷，掌握治療的最佳時(shí)機(jī)，是當(dāng)前的重中之重。
　　 P基因由1655個(gè)核糖核苷酸組成，位于基因組的1742～

2、3396核苷酸處。其中P基因包含兩個(gè)部分重疊的閱讀框架，編碼三種蛋白，結(jié)構(gòu)蛋白P，非結(jié)構(gòu)蛋白V和C。P蛋白是CDV結(jié)構(gòu)蛋白中第二大蛋白，具有聚合酶的功能，在接種病毒12h后可以檢測出為磷酸化的P蛋白，是出現(xiàn)早，且持續(xù)存在的蛋白，且基因在該病毒的譜系中極為保守，將其作為診斷抗原或制備診斷抗體具有可行性。本研究以Ameirica 1型疫苗變異株為基礎(chǔ)，在國內(nèi)首次表達(dá)純化了P1（232-507AA）蛋白，通過其中P間接免疫試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在病毒感染

3、細(xì)胞P蛋白存在細(xì)胞核，這大概與P蛋白轉(zhuǎn)錄復(fù)制功能分不開；以純化的P1蛋白免疫BABL/c小鼠，制作單克隆抗體，得到兩株特異性的單克隆抗體E9E4C10和E9F8D9,為IgG2b亞型。期間用純化的CDV制備兔高免血清。對(duì)獲得的單抗和多抗采用ProteinG柱純化，一方面，以CDV多抗制備膠體金探針，以制作的兩株單抗包被纖維素膜作為檢測線，以商品化的羊抗兔IgG抗體作為控制線，制備膠體金免疫試紙條，檢出病毒濃度為1×105.4TCTD50