小麥DREB轉(zhuǎn)錄因子與冷激蛋白基因功能鑒定.pdf

1、干旱、高鹽和低溫等非生物脅迫是影響植物生長發(fā)育的主要限制因子，造成我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)減產(chǎn)的主要因素。植物在長期進化過程中，形成了一套嚴密而復雜的分子機制以減少或避免脅迫環(huán)境帶來的危害。近些年，對植物的抗逆機制研究取得了一定進展，通過分子生物學手段進行作物抗逆育種也越來越被研究者重視。轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育、植物逆境信號傳遞和相關功能基因表達中起到重要作用。
　　DREB轉(zhuǎn)錄因子能夠與 DRE/CRT順式作用元件發(fā)生特異性結合，激活抗

2、逆相關基因的表達，提高植物的抗逆性。本實驗進行了DREB轉(zhuǎn)錄因子表達特異性分析和互作候選蛋白的篩選以及冷激蛋白基因的功能分析。
　　1. DREB轉(zhuǎn)錄因子的表達分析。經(jīng)過ABA、高鹽和干旱脅迫處理的小麥幼苗提取RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，應用實時定量PCR技術對DREB2和DREB9轉(zhuǎn)錄因子基因進行表達特性分析。結果表明：DREB2和DREB9基因在各種脅迫條件下的響應程度和響應時間不同，并且DREB2和DREB9基因在ABA、干

3、旱和高鹽脅迫下的響應強烈，因此DREB2和DREB9基因在ABA、干旱和高鹽非生物脅迫應答反應中起到重要作用。
　　2. TaDREB6基因互作蛋白的篩選。研究證實TaDREB6基因在干旱脅迫應答反應過程中起調(diào)控作用。本研究構建了小白麥cDNA文庫，以TaDREB6為誘餌，利用酵母雙雜交技術從小白麥cDNA文庫中篩選TaDREB6互作蛋白，對篩選到的候選陽性克隆進行測序和比對分析，獲得與能量代謝、抗逆和防御、轉(zhuǎn)運、轉(zhuǎn)錄和翻譯、信號

4、轉(zhuǎn)導以及生長發(fā)育等相關的候選蛋白，為進一步研究DREB介導的小麥抗逆機制提供了基礎。
　　3.轉(zhuǎn)W18基因小麥的獲得和冷激蛋白基因XuA和XuB的功能鑒定。構建轉(zhuǎn)小麥表達載體，利用基因槍法把W18基因轉(zhuǎn)入小麥，對 T0和T1代植株進行了陽性檢測。共獲得128株T0代植株，含有目的基因的陽性株為12株，含有Bar基因的陽性株為12株。獲得120株T1代植株，含有目的基因的陽性植株為51株，含有Bar基因的陽性植株是43株。構建XuA