凡納濱對蝦血細(xì)胞免疫抑制劑的篩選與免疫調(diào)控作用的研究.pdf

1、本文研究了凡納濱對蝦血細(xì)胞免疫抑制劑的篩選以及脂多糖與凝集素抑制劑聯(lián)合作用對對蝦的免疫調(diào)控作用。主要內(nèi)容包括:(1)凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)血細(xì)胞免疫活性培養(yǎng)技術(shù)的研究;(2)凡納濱對蝦血細(xì)胞酚氧化酶、凝集素抑制劑篩選技術(shù)的研究;(3)脂多糖與凝集素抑制劑聯(lián)合作用對凡納濱對蝦酚氧化酶原級聯(lián)系統(tǒng)的影響。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.凡納濱對蝦血細(xì)胞免疫活性培養(yǎng)技術(shù)的研究
　　 本文通過小鼠、兔、

2、鱸魚和人的ABO七種紅細(xì)胞與凡納濱對蝦血清凝集素發(fā)生凝集反應(yīng),選擇凝集效價最高的小鼠紅細(xì)胞測定對蝦血細(xì)胞凝集活性;同時本文選擇了四種培養(yǎng)基成分進(jìn)行凡納濱對蝦血細(xì)胞離體培養(yǎng),結(jié)果表明:四種培養(yǎng)基對凡納濱對蝦血細(xì)胞數(shù)量、存活率和酚氧化酶原級聯(lián)系統(tǒng)胞吐影響顯著(P＜0.05),隨著培養(yǎng)時間的延長,四種培養(yǎng)基各處理組血細(xì)胞數(shù)量、存活率和酚氧化酶原活力逐漸下降,而酚氧化酶活力逐漸升高。在12h內(nèi)二號培養(yǎng)基總血細(xì)胞數(shù)量和血細(xì)胞存活率均顯著高于一號、

3、三號和四號培養(yǎng)基,四種培養(yǎng)基在3-6h內(nèi),血細(xì)胞存活率趨于穩(wěn)定,6h之后逐漸下降:在0-3h內(nèi),.培養(yǎng)基一號、三號和四號凝集活性升高,之后逐漸下降,而二號培養(yǎng)基3h內(nèi)凝集活性沒有發(fā)生變化,6h降低后趨于穩(wěn)定;在0-6h內(nèi)培養(yǎng)基一號酚氧化酶原活力高于其他各組,培養(yǎng)基二號酚氧化酶活力最低,在12h時培養(yǎng)基二號酚氧化酶原活力最高,酚氧化酶活力與其他三組無明顯差異。由此得出結(jié)論,選擇二號培養(yǎng)基進(jìn)行凡納濱對蝦血細(xì)胞體外培養(yǎng)研究。
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4、.凡納濱對蝦血細(xì)胞酚氧化酶、凝集素抑制劑篩選技術(shù)的研究
　　 結(jié)果表明:三種濃度的酚氧化酶抑制劑p-APMSF對凡納濱對蝦血細(xì)胞數(shù)量和存活率影響顯著(P＜0.05),隨著培養(yǎng)時間的延長,各處理組血細(xì)胞數(shù)量、存活率逐漸下降。在6h內(nèi)25μm p-APMSF處理組顯著高于50μm和100μa處理組;在1-6h內(nèi),25μm處理組血細(xì)胞數(shù)量變化不顯著,但存活率差異顯著;在實(shí)驗(yàn)時間內(nèi),各處理組凝集活性比對照組升高,處理組之間,50μm和1

5、00μm處理組凝集活性相同,25μm處理組凝集活性最低;25μm處理組酚氧化酶原活力和絲氨酸活力顯著高于其他處理組,與p-APMSF濃度呈明顯的負(fù)相關(guān)性。三種凝集素抑制劑對凡納濱對蝦血細(xì)胞數(shù)量和存活率影響顯著(P＜0.05),在實(shí)驗(yàn)時間內(nèi),各處理組對蝦血細(xì)胞數(shù)量和存活率逐漸下降,在3-6h內(nèi),200mM葡萄糖處理組血細(xì)胞數(shù)量和存活率高于其他處理組,且變化不顯著;各處理組酚氧化酶活力逐漸升高,而血細(xì)胞酚氧化酶原活力逐漸下降;葡萄糖處理組對

6、凡納濱對蝦凝集活性完全抑制作用。因此,選擇葡萄糖作為凡納濱對蝦凝集素抑制劑進(jìn)行相關(guān)研究。
　　 3.脂多糖與凝集素抑制劑聯(lián)合作用對凡納濱對蝦酚氧化酶原系統(tǒng)的影響
　　 結(jié)果表明:脂多糖與凝集素抑制劑聯(lián)合作用對凡納濱對蝦總血細(xì)胞數(shù)量(THC)酚氧化酶原proPO級聯(lián)系統(tǒng)影響顯著(P＜0.05)。在實(shí)驗(yàn)時間內(nèi),各處理組血細(xì)胞數(shù)量和存活率均逐漸下降,與脂多糖處理組相比,脂多糖與凝集素抑制劑聯(lián)合作用處理組血細(xì)胞數(shù)量和存活率低;與

7、對照組相比,各處理組凡納濱對蝦凝集活性降低,3h內(nèi)LPS處理組與對照組對蝦凝集活性升高,而脂多糖與凝集素抑制劑聯(lián)合作用處理組凝集活性降低;3-6h內(nèi),各處理組對蝦凝集活性無顯著變化;脂多糖、脂多糖與凝集素抑制劑聯(lián)合作用對凡納濱對蝦胞吐酚氧化酶活力以及血細(xì)胞酚氧化酶原活力、血細(xì)胞絲氨酸蛋白酶原活力影響顯著(P＜0.05)。在實(shí)驗(yàn)時間內(nèi),各處理組酚氧化酶原活力和絲氨酸蛋白酶原活力均下降,與對照組相比,脂多糖處理組下降的幅度大;而酚氧化酶活力