玉米花粉萌發(fā)的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、花粉萌發(fā)和花粉管生長是種子植物有性生殖的重要環(huán)節(jié)之一。由于花粉在植物有性生殖過程中的特殊作用和花粉管極性生長的特性,多年來一直是研究細(xì)胞分裂、分化及細(xì)胞識(shí)別等重要生命過程的模型。目前對(duì)花粉管極性生長的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面的研究已取得較大進(jìn)展,但對(duì)花粉萌發(fā)過程中蛋白質(zhì)組的變化及蛋白質(zhì)的鑒定的研究仍較少。
　　 本研究以玉米花粉為材料,運(yùn)用雙向電泳結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)鑒定了玉米花粉萌發(fā)過程中差異表達(dá)的蛋白質(zhì),并對(duì)差異蛋白進(jìn)行分析。主要研究結(jié)果

2、如下:
　　 1.建立了一套適合玉米花粉雙向凝膠電泳體系。本研究采用pH4-7的11cm線性IPG預(yù)制膠條進(jìn)行第一向等電聚焦,低電壓主動(dòng)水化上樣,聚焦總量達(dá)到55000vhr。第二向使用12％SDS.PAGE膠。電泳后使用考馬斯亮藍(lán)R350染色。此體系得到的雙向電泳圖譜清晰,蛋白質(zhì)點(diǎn)形狀規(guī)則,重復(fù)性好,能較好地滿足后續(xù)串聯(lián)質(zhì)譜鑒定要求。
　　 2.選擇成熟花粉(PO)和離體萌發(fā)1小時(shí)花粉(P1)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。在雙向

3、凝膠上得到470個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn),其中28個(gè)點(diǎn)的表達(dá)豐度在P0和P1間差異較為顯著。鑒定了21種蛋白質(zhì),其中13個(gè)表達(dá)豐度上升,主要包括花粉管壁的修飾(果膠甲酯酶,高爾基體結(jié)合蛋白)、肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架組織(肌動(dòng)蛋白)、能量代謝(ATP酶亞基1、異檸檬酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶、焦磷酸酶、葡萄糖-1-磷酸酯尿甙基轉(zhuǎn)移酶等)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(RabGDP解離抑制因子、腺苷激酶)、蛋白質(zhì)的折疊與加工(線粒體加工肽酶、蛋白質(zhì)二硫化物異構(gòu)酶)等；8個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)