中草藥提取物對(duì)小鼠乳腺上皮細(xì)胞增殖作用的研究.pdf

1、本研究通過(guò)對(duì)小鼠乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法的篩選，培養(yǎng)出生理功能正常的小鼠乳腺上皮細(xì)胞，以該細(xì)胞為模型，研究中草藥提取物對(duì)小鼠乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。從昆明白鼠乳房無(wú)菌采取乳腺組織，通過(guò)不同的方法分離、培養(yǎng)、純化小鼠乳腺上皮細(xì)胞，研究小鼠乳腺上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)效果。顯微鏡下對(duì)分離純化的乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行觀察，做形態(tài)學(xué)鑒定；繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)并計(jì)算群體倍增時(shí)間；利用SDS-PAGE電泳檢測(cè)上皮細(xì)胞酪蛋白的分泌情況。在小鼠乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中添加復(fù)方和

2、5味主要單藥提取物，研究其對(duì)乳腺上皮細(xì)胞活力及凋亡的影響。
　　 試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 本試驗(yàn)中，組織塊培養(yǎng)與胰蛋白酶消化法相結(jié)合可獲得良好的小鼠乳腺細(xì)胞原代培養(yǎng)物。培養(yǎng)的小鼠乳腺成纖維細(xì)胞比上皮細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶更敏感，據(jù)此可在傳代過(guò)程中將二者分離純化，獲得純細(xì)胞系?；旌吓囵B(yǎng)物先用0.25％胰蛋白酶在37℃消化3～5 min所收集的細(xì)胞主要為成纖維細(xì)胞，再加0.25％胰蛋白酶消化液在37℃繼續(xù)消化5～7 min，所回收的細(xì)

3、胞絕大多數(shù)為上皮細(xì)胞，經(jīng)過(guò)2～3代，即可得到純化的乳腺上皮細(xì)胞系。
　　 中藥復(fù)方提取物在試驗(yàn)濃度下(1.6 mg·mL－1～0.2 g·mL－1)表現(xiàn)為促增殖作用(P＜0.05)，在濃度為0.2 g·mL－1時(shí)促細(xì)胞增殖作用最為顯著，隨著藥物濃度的降低，對(duì)細(xì)胞的作用不顯著(P＞0.05)：
　　 中草藥重樓在高濃度(0.2 g·mL－1)時(shí)抑制乳腺上皮細(xì)胞增殖(p＜0，05)，但隨著濃度的降低(40 mg·mL－1，3

4、20μg·mL－1)又出現(xiàn)明顯的促增殖作用(p＜0，05)，而其對(duì)細(xì)胞的促增殖作用與濃度未表現(xiàn)出線(xiàn)性關(guān)系；木芙蓉在試驗(yàn)中出現(xiàn)兩個(gè)抑制生長(zhǎng)的濃度（0.2 g·mL－1，8 mg·mL－1）和兩個(gè)促進(jìn)生長(zhǎng)的濃度(1.6 mg·mL－1，40 mg·mL－1)，且與對(duì)照組差異顯著(P＜0.05)，抑制峰與促生長(zhǎng)峰值所在濃度十分靠近；單味中藥澤蘭葉，在低于40 mg·mL－1濃度下均表現(xiàn)出顯著的促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞增殖的作用(P＜0.05)，而在高

5、濃度時(shí)(0.2 g·mL－1)表現(xiàn)出顯著的抑制效果(P＜0.05)；半枝蓮在濃度為0.2 g·mL－1時(shí)抑制作用明顯(p＜0.05)，但隨著濃度降低(1.6 mg.mL－1～8mg·mL－1)，也表現(xiàn)出顯著的促進(jìn)作用(p＜o(jì)．05)，峰值濃度為1.6 mg·mL－1；紫花地丁沒(méi)有表現(xiàn)出顯著的抑制生長(zhǎng)作用，其促增殖濃度的峰值在40 mg·mL－1左右(p＜0.05)，隨著濃度的降低，該促增殖作用逐漸變得不顯著。
　　 試驗(yàn)證實(shí)，上