基于SSR標記的玉米品種DNA指紋圖譜的構(gòu)建.pdf

1、該研究基于SSR標記技術(shù),在初步篩選、確定核心引物并對多重PCR探討的同時,以玉米雜交種及其親本為材料,構(gòu)建一套玉米品種的SSR-DNA指紋圖譜.該研究為"中國玉米新品種標準DNA指紋庫建立"、玉米品種真實性鑒定和純度檢測提供參考.其研究結(jié)果如下:1.該試驗用SSR標記技術(shù)對60份玉米自交系進行分析,從1 60對SSR引物中篩選出62對多態(tài)性豐富、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好的引物.研究發(fā)現(xiàn),用單一引物不能鑒別所有供試自交系,而用若干引物的組合可

2、區(qū)分全部的60份玉米自交系.2.對篩選出的62對SSR引物進行分析,綜合考慮PIC值大小、擴增帶型統(tǒng)計的難易及引物的重復(fù)性高低,確定bnlg439、bnlg125、phi053、bnlg197、phi072、bnlg23 8、phi126、bnlg161、bnlg240、bnlg61 9共1 0個引物對作為構(gòu)建玉米自交系和雜交種指紋圖譜的核心引物;同時提出適用于計算玉米SSR-DNA指紋圖譜概率的公式:P=1/N,對純系N=n;對雜交種

3、,N=C<,n><'1>+C<,n><'2>.n為所用引物的等位基因數(shù).3.根據(jù)21對玉米SSR引物單一擴增片段大小,組成不同的引物組合進行多重PCR反應(yīng)的研究.在與單一PCR相同的反應(yīng)條件下,47個兩重PCR組合出現(xiàn)5種不同的擴增情況,其中30個組合擴增正常;10個三重PCR組合中有9個組合擴增正常;兩個四重PCR組合中有1個擴增正常,這些篩選出的正常擴增的組合可應(yīng)用于今后玉米DNA指紋庫構(gòu)建研究中.研究表明,應(yīng)用與單一PCR完全相同

4、的反應(yīng)條件,大部分能夠獲得正常擴增的多重PCR組合,在此基礎(chǔ)上提出了簡化的多重PCR優(yōu)化程序.4.利用14對SSR引物構(gòu)建玉米雜交種與親本的DNA指紋圖譜,其中"雙親互補型"是鑒別雜交種和親本的最佳類型,"偏母型"、"偏父型"可能由于自交系的不完全純合或供試親本不是雜交種的原始親本造成的.在試驗中某些引物在親本自交系中出現(xiàn)雙帶,分析認為可能是由于正負鏈電泳行為差異造成的.利用雜交種指紋圖譜與其互補帶型,可簡便、準確地鑒別玉米雜交種純度及