馬鈴薯抗青枯病相關(guān)基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、馬鈴薯是世界四大作物之一，在世界的食品安全體系中具有重要的作用。馬鈴薯青枯病(Ralstonia solanacearum)叫是馬鈴薯生產(chǎn)上的重要病害，目前仍沒有行之有效的化學(xué)藥劑防治辦法。實(shí)踐證明培育抗病品種才是防治青枯病的根本途徑，然而馬鈴薯普通栽培種中未見有較好的抗青枯病種質(zhì)資源。研究發(fā)現(xiàn)，二倍體馬鈴薯原始栽培種和野生種中存在有青枯病的抗源，因此從二倍體馬鈴薯原始栽培種和野生種中克隆抗青枯病基因并進(jìn)行同源基因轉(zhuǎn)化，將成為培育抗青枯

2、病品種的重要手段。本文在前人研究的基礎(chǔ)上，利用RACE技術(shù)克隆了馬鈴薯類受體激酶基因全長cDNA，并對幾個感興趣的抗青枯病相關(guān)基因進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，為進(jìn)一步研究這些基因的功能及進(jìn)一步深入探討馬鈴薯抗青枯病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.選用二倍體馬鈴薯高抗青枯病基因型ED13的莖段外植體為材料，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將構(gòu)建好的類受體激酶(L77)、蛋白酶抑制子(L129)、果膠甲酯酶抑制子(L222)、蛋白激酶(L362)等

3、基因的RNA干擾載體PCH-L77、PCH-L129、PCH-L222和PCH-L362導(dǎo)入二倍體馬鈴薯高抗青枯病基因犁ED13中，獲得了10株抗慶火霉素的再生植株。
　　 2.利用CaMV35S啟動子特異引物對10株再生植株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中5株再生植株擴(kuò)增出了特異條帶，大小約為500bp，與預(yù)期結(jié)果一致，且這5棵植株均為類受體激酶基因(L77)的再生植株。進(jìn)一步利用RT-PCR方法對這5棵植株進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)該基因的表達(dá)均受