柑橘黃龍病病原多態(tài)性及抗血清的制備與應(yīng)用.pdf

1、本研究應(yīng)用8個不同地區(qū)亞洲種病原DNA片段及16S rDNA經(jīng)PCR擴增后分別得到長約為563bp和1160bp左右的片段，表明他們在長度上沒有明顯區(qū)別。進一步的SSCP結(jié)果顯示，不同地區(qū)柑橘黃龍病亞洲種病原DNA片段及16SrDNA序列在組成上也沒有差異，這說明來自不同地區(qū)、不同寄主品種的柑橘黃龍病亞洲種在16S rDNA和及部分DNA片段上沒有明顯差異。 利用CTAB法從不同地區(qū)的感病長春花葉片中獲取病原的總DNA，合成含有

2、合適酶切位點的引物，通過PCR方法擴增出特異性目的條帶。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)回收、連接、轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌克隆至pMD18-T載體上，經(jīng)藍白斑和氨芐青霉素抗性篩選、PCR和雙酶切鑒定，獲得了重組質(zhì)粒pT-HLBOMP，并進行序列測定，應(yīng)用生物信息學(xué)軟件對核苷酸、編碼蛋白的理化性質(zhì)、同源性等進行預(yù)測分析。 利用傳統(tǒng)方法提純病原，用于免疫家兔制備抗血清。提純的病原制備的抗血清效價均達到1：12800，工作濃度分別定為1：1600，以上