稻瘟病菌轉(zhuǎn)錄因子Moswi6的功能研究.pdf

1、稻瘟病是影響全球水稻產(chǎn)量的重要病害，其病原真菌（Magnaporthe oryzae）與水稻的互作系統(tǒng)已成為研究植物病原真菌與寄主互作較為理想的模式系統(tǒng)之一，稻瘟病菌也是研究絲狀真菌生長(zhǎng)發(fā)育和侵染致病機(jī)制的重要模式生物。轉(zhuǎn)錄因子是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵因子，從研究轉(zhuǎn)錄因子的功能入手來(lái)解析稻瘟病菌生長(zhǎng)發(fā)育與致病性過(guò)程中的分子機(jī)制具有重要意義，可以為尋找新的稻瘟病菌殺菌劑作用靶標(biāo)，設(shè)計(jì)新的稻瘟病控制策略提供理論依據(jù)。
　　 真核生物中，

2、促分裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase，MAPK)途徑是一類重要的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。模式真菌酵母中，SLT2 MAPK信號(hào)通路參與調(diào)控細(xì)胞壁完整性和氧脅迫。而真菌的細(xì)胞壁是很多抗真菌的藥物靶標(biāo)，因此對(duì)于這條MAPK信號(hào)通路，特別是這條通路下游轉(zhuǎn)錄因子的深入研究可能有助于病害的防治研究。
　　 SLT2在稻瘟病菌中的同源基因是Mps1，該基因的缺失影響產(chǎn)孢、附著胞形成和致病性。酵母中

3、，Swi6是SLT2下游的轉(zhuǎn)錄因子，本文根據(jù)同源序列比對(duì)，在稻瘟病菌基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索到一個(gè)與酵母Swi6同源的基因，并命名為Moswi6。序列分析表明該基因編碼的蛋白含有806個(gè)氨基酸，該蛋白包含一個(gè)APSES結(jié)構(gòu)域和一個(gè)ANKrepeats結(jié)構(gòu)域。Sourthern雜交顯示該基因在稻瘟病菌基因組中為單拷貝。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)表明該基因能夠與其上游Mps1互作，證明該基因是Mps1 MAPK下游轉(zhuǎn)錄因子。本文采用原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化和同源重組技術(shù)

4、獲得了稻瘟病菌的Moswi6敲除突變體，并對(duì)其各種生物學(xué)表型進(jìn)行了分析。研究表明Moswi6敲除突變體生長(zhǎng)速率減慢、孢子萌發(fā)及附著胞形成階段均有缺陷；附著胞內(nèi)膨壓減?。籑oswi6敲除突變體對(duì)金屬離子、SDS、滲透壓等細(xì)胞壁相關(guān)的脅迫耐受性增強(qiáng)；對(duì)菌絲進(jìn)行CFW染色顯示突變體的細(xì)胞壁幾丁質(zhì)分布發(fā)生變化，形成很多菌絲膨大體。熒光定量PCR檢測(cè)突變體內(nèi)幾丁質(zhì)合酶表達(dá)量的變化，表明幾丁質(zhì)合酶表達(dá)量顯著升高；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，突變體對(duì)外源氧脅迫更