留蘭香提取物抗菌抗病毒作用研究.pdf

1、留蘭香(MenthaspicataLinn),又名綠薄荷、青薄荷、花香菜,唇形科薄荷屬植物,是重要的特用經(jīng)濟(jì)天然香料作物。原產(chǎn)歐洲,20世紀(jì)80年代初我國(guó)從美國(guó)引種,近年來(lái),種植面積大規(guī)模提高。在民間被廣泛藥用和食用,具疏風(fēng)散熱、和中理氣、辟穢解毒、消炎、止血、收斂等功效。我們就留蘭香抗菌抗病毒作用作了初步研究,為留蘭香在畜牧生產(chǎn)上的應(yīng)用提供一定的試驗(yàn)依據(jù)。
　　 1.留蘭香抗菌作用研究
　　 選用雞沙門(mén)氏菌、雞大腸桿菌

2、、豬腸球菌、豬葡萄球菌作為試驗(yàn)菌株,采用管碟法測(cè)定留蘭香提取物抑菌圈大小,采用試管2倍稀釋法測(cè)定留蘭香提取物對(duì)4種動(dòng)物病原菌的最低抑菌濃度(MIC),判定抗菌效果。數(shù)據(jù)顯示:留蘭香水煎劑、醇提物、揮發(fā)油對(duì)4種動(dòng)物病原菌有不同程度的抗菌作用,尤其是對(duì)豬葡萄球菌抑制效果比較明顯,留蘭香水煎劑Ⅰ的MIC為31.25mg/ml,醇提物Ⅲ的MIC為62.5mg/ml,揮發(fā)油Ⅴ的MIC為2.32mg/ml,揮發(fā)油Ⅵ的MIC為2.31mg/ml。結(jié)果

3、表明:留蘭香水煎劑、醇提物及揮發(fā)油體外有一定抑菌作用,不同提取方法所得提取物對(duì)試驗(yàn)菌抑制效果不同。
　　 2.留蘭香抗病毒作用研究
　　 本試驗(yàn)選取豬細(xì)小病毒作為供試毒株研究留蘭香提取物的抗病毒作用：
　　 1)通過(guò)觀察病毒引起的細(xì)胞病變效應(yīng)(Cytopathogeniceffect,CPE)和MTT比色法檢測(cè)藥物抗PPV活性,計(jì)算藥物對(duì)病變的抑制率和半數(shù)抑制濃度(50％inhibitoryconcentrati

4、on,IC50),并從藥物預(yù)防給藥(抗病毒吸附)、藥物對(duì)病毒的直接殺滅作用及治療給藥(抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的生物合成)3個(gè)方面初步探索留蘭香提取物抗PPV活性的作用機(jī)制。結(jié)果顯示留蘭香揮發(fā)油在三種作用方式中對(duì)PPV均有抑制作用,其半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為O.008mg/ml、0.0019mg/ml、0.0036mg/ml,治療指數(shù)(TI)分別為32.13、135.26、70.6。留蘭香水煎劑和粗提物對(duì)PPV侵入細(xì)胞無(wú)阻止作用,但在直接

5、滅活和抑制其在細(xì)胞內(nèi)的增殖方面均有較高的活性,對(duì)PPV直接殺滅的半數(shù)有效濃度(IC50)分別為0.034mg/ml、0.356mg/ml,治療指數(shù)(TI)分別為86.59、12.26；抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的生物合成的半數(shù)有效濃度(IC50)分別為0.043mg/ml、0.063mg/ml,治療指數(shù)(TI)分別為68.47、69.26。
　　 2)建立了豬細(xì)小病毒的SYBRGreenI實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法,并應(yīng)用其測(cè)定PPV在P

6、K-15細(xì)胞中的增殖規(guī)律,并依據(jù)其規(guī)律測(cè)定留蘭香提取物作用于PPV后的各個(gè)時(shí)間段的病毒DNA含量,進(jìn)一步測(cè)定了留蘭香提取物在PK-15細(xì)胞上對(duì)PPV的抑制作用規(guī)律。結(jié)果表明,藥物處理后病毒的增殖、釋放仍呈現(xiàn)其應(yīng)有的規(guī)律,但在各個(gè)階段均受到了藥物的抑制,拷貝數(shù)相對(duì)來(lái)說(shuō)有了大幅的減少,細(xì)胞層中的病毒含量與病毒對(duì)照相比相差3～5個(gè)數(shù)量級(jí),而上清液中病毒含量與病毒對(duì)照相比相差3～7個(gè)數(shù)量級(jí),極有效地抑制了病毒在細(xì)胞中的復(fù)制與釋放,從而抑制了細(xì)胞