小麥葉片水分脅迫下cDNA-AFLP差異表達(dá)分析.pdf

1、干旱是目前對作物生產(chǎn)力影響最大的環(huán)境脅迫因子，所造成的產(chǎn)量損失超過其他各種脅迫因子造成損失的總和。作物的抗旱性狀由多基因控制，受遺傳等因素影響。作物對干旱的耐受性在一定程度上具有相同的分子基礎(chǔ)，很多基因的表達(dá)受水分脅迫的誘導(dǎo)并在作物抵抗水分脅迫中起作用。如何提高作物的抗旱性，使作物能夠在干旱脅迫環(huán)境下獲得較高的品質(zhì)和理想的產(chǎn)量，一直是人們關(guān)注的焦點和研究的熱點。探明耐旱作物對干旱脅迫的分子反應(yīng)機(jī)理，對作物抗旱育種以及抗旱栽培技術(shù)等研究具

2、有重要的現(xiàn)實意義。
　　 本實驗以新疆春小麥主栽品種新春6號為實驗材料，新春6號是一個典型即抗旱又具備高水分利用效率的品種。利用cDNA-AFLP技術(shù)分析該品種在兩葉一心水分脅迫下基因表達(dá)的差異，建立了一套適合小麥葉片基因表達(dá)差異的研究體系，并獲得一些可能與小麥抗旱和水分高效利用相關(guān)的基因表達(dá)序列標(biāo)簽。研究結(jié)果如下：
　　 （1)通過實驗比較，確定了適合小麥葉片cDNA-AFLP分析的總RNA提取方法。
　　 （

3、2)比較了兩套cDNA-AFLP方案，雙酶切法在實驗結(jié)果的多態(tài)性、可靠性等方面優(yōu)于單酶切法，確定雙酶切法cDNA-AFLP更適合水分脅迫下小麥基因表達(dá)差異的研究。
　　 （3)依據(jù)雙酶切法cDNA-AFLP基本原理，對技術(shù)體系進(jìn)行研究，并對擴(kuò)增體系進(jìn)行優(yōu)化，建立了一套適合小麥基因差異表達(dá)研究的cDNA-AFLP技術(shù)體系。
　　 （4)實驗對新春6號兩葉一心水分脅迫進(jìn)行了基因表達(dá)差異分析，利用253對選擇性擴(kuò)增引物分析，發(fā)

4、現(xiàn)748條差異條帶，回收了44個，這些差異條帶均表現(xiàn)為上調(diào)差異類型。
　　 （5)選取10條差異條帶進(jìn)行了克隆測序，利用BLAST對差異表達(dá)片段序列進(jìn)行序列同源性分析。10個序列在BLAST數(shù)據(jù)庫中均找到同源序列，主要涉及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、能量代謝、細(xì)胞生長發(fā)育和逆境響應(yīng)等類別：1)應(yīng)答水分脅迫的生長發(fā)育基因：主要有與線粒體26rRNA基因和線粒體基因同源性較高的TDFHh2-1、TDFHh4-3和TDFHh3-3；與葉綠體D