豬繁殖與呼吸綜合征病毒的RNA多態(tài)性研究.pdf

1、2006我國南方地區(qū)發(fā)生了以高熱、高發(fā)病率、高死亡率為特征的傳染病。而后蔓延到全國大部分養(yǎng)豬地區(qū),給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。該病于2006年7月傳入福建省,之后在我省迅速蔓延傳播。本試驗的目的是利用mRNA差異顯示技術(shù),建立PRRSV多態(tài)性研究的方法,并通過此技術(shù)獲得病毒變異相關(guān)基因片段。
　　 本研究采用mRNA差異顯示技術(shù),以實驗室分離保存的普通型PRRSV-FJ02A株、變異型PRRSV-FJ06A株、變異型PRR

2、SV-FJ07A株、變異型PRRSV-FJ08A株等4株病毒為實驗材料,進行四株病毒的基因差異表達分析。采用3條錨定引物和20條隨機引物進行mRNA差異顯示試驗,試驗經(jīng)過引物篩選、變性聚丙烯酰氨凝膠電泳、銀染等過程最后篩選獲得10條差異表達片段。將其中兩條片段進行回收,將這兩條片段分別連接到T載體上,然后轉(zhuǎn)化到DH5a上,接著挑菌、提取質(zhì)粒,通過酶切鑒定,篩選出陽性克隆,最后進行測序。測序結(jié)果表明:在這兩個片段的兩端均分別有mRNA差異

3、顯示技術(shù)所用引物的結(jié)合位點,片段大小也與PCR擴增出來的條帶大小相一致,片段長度分別為209bp和272bp進一步證實了目的片段的正確性。使用NCBI的blast程序和DNASTAR軟件;對這兩個片段的進行序列分析,結(jié)果表明引物組合錨定1-S2差異片段與數(shù)據(jù)庫中其他PRRSV全基因序列相似性較低。兩個差異片段與VR2332株比較核苷酸同源性分別78.9％和68.6％。并且這兩個片段分別在不同部位出現(xiàn)不同程度的堿基突變或缺失,因此初步推測