脂多糖、多巴胺對凡納濱對蝦血細胞作用機制的研究.pdf

1、本文研究了脂多糖、多巴胺對凡納濱對蝦血細胞吞噬作用和酚氧化酶原激活系統(tǒng)(proPO)的影響。主要探討了(1)凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)血細胞的體外免疫活性保存技術(shù);(2)脂多糖、多巴胺對凡納濱對蝦血細胞吞噬作用機制的研究;(3)脂多糖、多巴胺對凡納濱對蝦血細胞酚氧化酶原系統(tǒng)的影響;主要結(jié)果如下:
　　 1.凡納濱對蝦血細胞體外免疫活性保存技術(shù)的研究
　　 結(jié)果表明:4種保存液(CM、AC、MBH

2、SS、M199)對凡納濱對蝦血細胞數(shù)量、存活率和酚氧化酶原級聯(lián)系統(tǒng)胞吐影響顯著(P＜0.05),隨著孵育時間的延長,4種保存液各處理組血細胞數(shù)量、存活率和絲氨酸蛋白酶原、酚氧化酶原活力逐漸下降,而酚氧化酶活力逐漸升高。在60min內(nèi)CM處理組血細胞數(shù)量、存活率顯著高于MBHSS和M199處理組,而CM與AC處理組在40min內(nèi)無顯著性差異,60min時CM處理組血細胞存活率明顯高于.AC處理組,而血細胞數(shù)量無顯著差異;在0-20min內(nèi)

3、CM處理組絲氨酸蛋白酶原、酚氧化酶原活力均高于其它處理組,釋放的酚氧化酶活力則低于其它處理組,而在40-60min內(nèi)CM處理組與其它處理組各指標差異顯著。同時在O-40min內(nèi)CM處理組各指標無明顯變化,60min時差異顯著。由此可見,CM緩沖液可作為凡納濱對蝦血細胞體外免疫活性的保存液,而且體外實驗應在40min內(nèi)完成。
　　 2.脂多糖、多巴胺對凡納濱對蝦血細胞吞噬作用機制的研究
　　 結(jié)果表明:脂多糖LPS、多巴胺

4、DA對凡納濱對蝦血細胞數(shù)量和吞噬率影響顯著(P＜0.05),LPS、DA與血細胞孵育30min后,高濃度(1-10mg/L或μmol/L)處理組對蝦血細胞數(shù)量均隨作用濃度增大而明顯下降,LPS處理組對蝦血細胞吞噬率顯著升高,而DA處理組對蝦血細胞吞噬率則表現(xiàn)出明顯的下降趨勢。同時在LPS作用下,分別加入PKC、TPK抑制劑chelerythrine、genistein后,凡納濱對蝦血細胞吞噬功能受到明顯的抑制作用,且抑制劑對吞噬的抑制效

5、果為genistein＞chelerythrine;在DA作用下,加入PKA抑制劑H-89后,血細胞吞噬作用得到增強,而chelerythrine、genistein兩種抑制劑對吞噬無顯著影響。
　　 3.脂多糖、多巴胺對凡納濱對蝦血細胞酚氧化酶原系統(tǒng)的影響
　　 結(jié)果表明:LPS、DA對凡納濱對蝦總血細胞數(shù)量(THC),三類血細胞數(shù)量(DHC)和酚氧化酶原proPO系統(tǒng)影響顯著(P＜0.05)。LPS、DA與血細胞孵育

6、30min后,高濃度(1-10mg/L或μmol/L)處理組總血細胞數(shù)量,小顆粒細胞數(shù)量(SGC)以及大顆粒細胞(LGC)均顯著下降,絲氨酸蛋白酶及血細胞酚氧化酶原活性明顯降低,而胞吐酚氧化酶活性則顯著升高。同時,在LPS、DA作用下,加入PKC抑制劑chelerythrine后,凡納濱對蝦血細胞絲氨酸蛋白酶原及血細胞酚氧化酶原活力均顯著升高,胞吐酚氧化酶活力明顯受到抑制,加入。TPK抑制劑genistein后,胞吐酚氧化酶活力同樣下降

7、顯著,而對絲氨酸蛋白酶原活力無影響,而加入PKA抑制劑H-89則對酚氧化酶原系統(tǒng)無顯著影響。因此,凡納濱對蝦血細胞酚氧化酶的激活可能受到PKC和TPK信號通路共同調(diào)節(jié),而絲氨酸蛋白酶原的激活可能僅受PKC信號通路調(diào)節(jié)。另外,電泳結(jié)果顯示,LPS,DA誘導凡納濱對蝦血細胞釋放的酚氧化酶具有相同的分子量以及較高的雙酚活性。PAGE電泳下,血細胞胞吐的酚氧化酶蛋白分子量分別為526kDa和272kDa,而血細胞溶解產(chǎn)物僅得到一條蛋白條帶為27