喹賽多對(duì)豬肝胰島素樣生長因子-1和表皮生長因子mRNA表達(dá)的影響研究.pdf

1、喹賽多為喹喔啉類抗菌促生長新藥，對(duì)豬、牛、雞等有明顯的促生長作用，但目前對(duì)其促生長機(jī)制還不清楚。該文運(yùn)用相對(duì)定量RT-PCR方法，研究喹賽多對(duì)原代培養(yǎng)豬肝細(xì)胞以及仔豬肝臟組織中胰島素樣生長因子-1(Insulin-likegrowthfactor-1，IGF-1)和表皮生長因子(Epidermalgrowthfactor，EGF)mRNA表達(dá)的影響，探討喹賽多抗菌促生長的機(jī)理。 豬肝細(xì)胞的原代培養(yǎng)采用Seglen建立的兩步灌注酶

2、消化法并稍加改進(jìn)(Seglen，1976)。將分離的豬肝細(xì)胞按5×105/孔接種于24孔培養(yǎng)板，每孔加培養(yǎng)液900μL，放入37℃5％二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞80％匯合后，分別加入PBS100μL、生長激素100μL、喹賽多100μL，分成PBS組、生長激素(0.01ng/mL、0.1ng/mL、1.0ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)組、喹賽多(50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL、80

3、0ng/mL)組，繼續(xù)培養(yǎng)48h，提取細(xì)胞總RNA。另取一塊24孔培養(yǎng)板，按上述接種方法培養(yǎng)肝細(xì)胞48h后，分別按生長激素100ng/mL、喹賽多400ng/mL添加于培養(yǎng)液中，PBS對(duì)照組加入等體積的PBS，于4h、8h、12h、24h、48h提取細(xì)胞總RNA。將以上總RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄PCR。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物用1％瓊脂糖凝膠分離后，用SYNGENE凝膠成像系統(tǒng)分析目的條帶的相對(duì)灰度值。以上各組均取3孔做細(xì)胞計(jì)數(shù)，觀察藥物對(duì)細(xì)胞增殖情況的影響

4、。結(jié)果表明，喹賽多按200ng/mL添加于原代培養(yǎng)豬肝細(xì)胞中可顯著提高其IGF-1mRNA表達(dá)(P＜0.05)，而該濃度喹賽多對(duì)EGFmRNA表達(dá)無顯著影響(P＞0.05)；喹賽多400ng/mL、800ng/mL對(duì)IGF-1mRNA和EGFmRNA表達(dá)均有顯著影響(P＜0.05)，但二劑量組間均無顯著性差異(P＞0.05)。喹賽多以400ng/mL添加于原代培養(yǎng)的豬肝細(xì)胞8h就可顯著提高EGFmRNA表達(dá)(P＜0.05)，而此時(shí)對(duì)IG

5、F-1mRNA表達(dá)無顯著影響(P＞0.05)；12h，24h，48h均可顯著提高IGF-1mRNA和EGFmRNA的表達(dá)(P＜0.05)。細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果表明，喹賽多對(duì)肝細(xì)胞的增殖無明顯影響。 動(dòng)物試驗(yàn)采用9頭去勢(shì)長大公豬，體重10.0±2.0kg，隨機(jī)分成3組，每組3頭。按美國NRC營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(1998)飼養(yǎng)。空白對(duì)照組每天飼喂空白料，生長激素對(duì)照組每天上午9：00按4mg/d劑量肌注pGH，試驗(yàn)組按200mg/kg飼喂喹賽多，各

6、組均采取自由采食。試驗(yàn)期為10天，最后一天用藥4h后屠宰采樣，樣品立即放液氮速凍后轉(zhuǎn)到-70℃冰箱保存?zhèn)溆茫孟鄬?duì)定量RT-PCR分析肝臟中EGF和IGF-1mRNA的表達(dá)量。喹賽多以飼料添加劑形式給藥仔豬，可顯著提高其體增重(P＜0-05)，且可顯著提高其肝臟組織中EGF和IGF-1mRNA的表達(dá)(P＜0.05)。 結(jié)論：喹賽多促生長機(jī)理可能是通過提高動(dòng)物體內(nèi)IGF-1和EGF等生長因子的轉(zhuǎn)錄而發(fā)揮作用。該文初步建立了用分子生