甜瓜酸性轉(zhuǎn)化酶基因表達(dá)特性分析及功能鑒定.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文甜瓜酸性轉(zhuǎn)化酶基因表達(dá)特性分析及功能鑒定姓名：樊繼德申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：于喜艷20070524山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本文以厚皮甜瓜M013(Cucum／smeloL)自交系為試驗(yàn)材料，采用子房注射法將含有CaMV35S啟動(dòng)子和Nos終止子的反義酸性轉(zhuǎn)化酶基因植物表達(dá)載體(anti砌f『)轉(zhuǎn)化甜瓜。運(yùn)用PCR、SouthernBlot、PCRSouthcrnBlot和NorthernBlo

2、t對(duì)轉(zhuǎn)化植株的T0和TI代進(jìn)行了分子鑒定。測定了轉(zhuǎn)基因植株Tl代果實(shí)發(fā)育期的蔗糖、葡萄糖和果糖以及轉(zhuǎn)化酶活性和其它生長勢等指標(biāo)，旨在研究AI基因在甜瓜果實(shí)發(fā)育和糖分積累中的功能，為利用分子生物學(xué)手段進(jìn)行甜瓜品質(zhì)育種提供理論依據(jù)。主要結(jié)果如下：l、利用子房注射法，將antiMA／1基因轉(zhuǎn)化甜瓜果實(shí)，應(yīng)用PCR和SouthernBlot對(duì)后代進(jìn)行分子鑒定，在獲得的330株成苗中，共鑒定出2株轉(zhuǎn)基因植株，轉(zhuǎn)化效率為06％，且均有兩個(gè)拷貝PCR

3、SouthemBlot鑒定結(jié)果表明，antiMAll基因己在孔代轉(zhuǎn)基因植株穩(wěn)定遺傳2、提取對(duì)照和Tl代轉(zhuǎn)基因植株甜瓜根、莖、葉、花和不同發(fā)育期果實(shí)的總RNA，以地高辛標(biāo)記的RNA探針進(jìn)行Northern雜交。結(jié)果表明，不同組織中AI基因表達(dá)差異明顯，在對(duì)照果實(shí)各發(fā)育時(shí)‘期均有不同程度的表達(dá)，而轉(zhuǎn)基因果實(shí)只有發(fā)育初期AI基因有少量表達(dá)，果實(shí)發(fā)育的中后期AI基因表達(dá)量受到了不同程度的抑制。3、對(duì)對(duì)照和Tl代轉(zhuǎn)基因植株甜瓜果實(shí)各發(fā)育期的蔗糖、

4、葡萄糖、果糖、酸性轉(zhuǎn)化酶和中性轉(zhuǎn)化酶進(jìn)行了測定，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因果實(shí)蔗糖含量有不同程度的提高，而葡萄糖、果糖含量和酸性轉(zhuǎn)化酶活性均降低，但中性轉(zhuǎn)化酶活性變化不大。說明AI基因?qū)麑?shí)的糖分組成具有調(diào)控作用，且進(jìn)一步證明酸性轉(zhuǎn)化酶活性的下降是蔗糖積累的關(guān)鍵因素和必要前提。4、對(duì)對(duì)照和Tl代轉(zhuǎn)基因植株生長勢和果實(shí)質(zhì)量積累動(dòng)態(tài)等指標(biāo)進(jìn)行了測定，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因植株生長勢變?nèi)?，果?shí)單果重降低，說明越基因?qū)μ鸸现仓晟L和果實(shí)發(fā)育也具有調(diào)控作用。關(guān)鍵詞：