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文檔簡介
1、采用農桿菌介導的大豆子葉節(jié)轉化系統(tǒng)成功地將Bt基因(cryLA)導入大豆。從發(fā)芽5-7天的大豆無菌苗切取子葉節(jié)外植體,經農桿菌感染和共培養(yǎng)后,在選擇培養(yǎng)基上4周左右出現抗性不定芽。將不定芽轉移到芽伸長培養(yǎng)基上,4-6周后再生苗長至2.5-3cm高。再將再生苗切下轉入生根培養(yǎng)基,2周左右生根。生根后的再生植株經逐步鍛煉移入盆中,所有植株均能正常開花結莢。在移栽成活的8株T_0植株中有7株PCR檢測呈陽性反應;在7個T_1株系中有4個株系存
2、在PCR陽性植株。取4個穩(wěn)定遺傳的T_1代株系內的陽性植株的葉片提取DNA,用地高辛標記的Bt基因探針進行Southern雜交分析,結果4個株系均呈現陽性,證明Bt基因已整合到受體大豆的基因組內并能傳遞給后代。轉基因植株的葉片能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上形成愈傷組織;轉基因植株的葉片和莖切片能被X-Gluc不同程度地染色;苜蓿夜蛾幼齡幼蟲的接種鑒定,有兩個轉基因株系表現出明顯的抗蟲性。這些結果證明被轉的nptⅡ、gus和Bt基因均在轉基因植
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