流蘇、金釵、報春石斛種子非共生萌發(fā)以及流蘇石斛離體保存的研究.pdf

1、流蘇石斛(Dendrobium fimbriatum Hook．)、金釵石斛(D．nobile Lindl．)和報春石斛(D．primulinum Lindl．)屬于蘭科(Orchidaceae)石斛屬(Dendrobium)，具有重要的觀賞價值和藥用價值。由于其自身生物學特性及人為破壞等因素，野生石斛資源瀕臨滅絕。本文通過對流蘇石斛繁育系統(tǒng)的初探以及流蘇石斛、金釵石斛和報春石斛種子非共生萌發(fā)的系統(tǒng)研究，為野生石斛的工廠化育苗提供了參考

2、數(shù)據(jù)；同時在組織培養(yǎng)的基礎上，結合離體保存技術對野生石斛種質資源保存可行性進行了研究，以期找到野生石斛種質資源最佳的中長期保存方法，對保護生物多樣性的保護具有積極意義。 本試驗通過不同授粉方式，對流蘇石斛繁育系統(tǒng)進行了研究，結果表明：流蘇石斛既不存在無融合生殖也不存在自動自花授粉現(xiàn)象，它必須借助一定的傳粉媒介來實現(xiàn)繁殖成功。流蘇石斛自交部分不親合，其自交結實率較低，僅為11.11％；異交結實率為76.47％，明顯高于自交結實率。

3、 對3種野生石斛種子非共生萌發(fā)試驗結果表明：培養(yǎng)溫度20～30℃時，3種石斛種子均可萌發(fā)，但25℃下表現(xiàn)最佳，其種子萌發(fā)整齊，圓球莖粒大呈鮮綠色。培養(yǎng)條件為KnudsonC(KC)+2mg/L6—BA+0.2mg/L NAA時最利于流蘇和金釵石斛原球莖誘導和幼苗分化，圓球莖誘導率分別為96.1％和97.3％，幼苗分化率分別為95.2％和95.7％；KC+0.5 mg/L NAA時最適報春石斛原球莖誘導和幼苗分化，誘導率和分化率分

4、別為90.3％和81.3％。培養(yǎng)基中添加1mg/LAC對3種石斛種子萌發(fā)影響不明顯，種子前期萌發(fā)整齊，生長勢好，但在圓球莖培養(yǎng)18～36d內出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。 對流蘇石斛離體保存的研究，分為幼苗低溫限制生長離體保存和圓球莖超低溫保存兩部分。 幼苗低溫限制生長離體保存：在15℃下，流蘇石斛試管幼苗生長受到抑制，KC培養(yǎng)基+3％mannitol，10個月后存活率可達96％。存活的幼苗接種于增殖培養(yǎng)基中，仍能正常生長、增殖和生根。

5、同時，KC培養(yǎng)基+1％mannitol，KC培養(yǎng)基+5％mannitol以及對照，試管幼苗10個月后存活率分別為68％，40％和28％；KC培養(yǎng)基+10～50mg/L B9，試管苗保存4個月后全數(shù)死亡；添加0.5mg/L NAA+1g/LAC的KC培養(yǎng)基中保存10個月后存活率為82％，效果較好；0.1mg/L NAA+1g/L AC和1.0mg/L NAA+1g/L AC組合存活率分別為72％，40％。 圓球莖超低溫保存：液體K

6、C培養(yǎng)基+10mg/L ABA，預處理10d后的流蘇石斛原球莖，脫水速率低于對照，脫水10h后含水量由初始10.1329g H2O g-1 DW降至0.2215g H2O g-1DW；對照含水量由初始11.0050g H2O g-1 DW降至0.1735g H2O g-1 DW。脫水10h后的存活率為62％，對照為57％。證明ABA預培養(yǎng)使原球莖獲得了更高的脫水耐性。脫水耐性是由一系列的損傷和保護機制相互協(xié)調的復雜生理現(xiàn)象。脂質過氧化反

7、應和活性氧壓造成損傷的重要原因。在脫水過程中，ABA處理及對照組合的流蘇石斛原球莖內CAT活性呈上升趨勢；APX活性呈下降趨勢；SOD活性則是先下降，在脫水6h時大幅上升后再下降；APX和SOD活性的降低在一定程度上被CAT活性的增加所補償。脫水6h時，ABA處理的原球莖含水量為0.6250g H2O g-1 DW，超低溫保存后，存活率和恢復率分別為74％和72％；對照原球莖含水量為0.4837g H2O g-1 DW，凍后的存活率和恢