銀杏雄株種質(zhì)資源遺傳多樣性分析.pdf

1、銀杏雌雄異株，并在長期的演化中形成了不同的種質(zhì)變異。我國是銀杏的故鄉(xiāng)，具有豐富的銀杏種質(zhì)資源。銀杏種質(zhì)資源是銀杏研究與開發(fā)利用的重要物質(zhì)支撐。銀杏雄株不僅在生態(tài)建設(shè)、觀賞美化中具有重要作用，而且在核用授粉樹配置、葉用及花用栽培中具有特殊的重要位置，其種質(zhì)資源的類型直接關(guān)系到銀杏雄株資源性狀的表達，研究其遺傳結(jié)構(gòu)及其多樣性對銀杏雄株種質(zhì)資源的開發(fā)利用具有重要理論與實踐意義。本研究連續(xù)兩年分別于萌芽后30d采集我國銀杏主要產(chǎn)區(qū)揚州市區(qū)、徐州

2、地區(qū)及揚州大學(xué)銀杏種質(zhì)資源圃的91株銀杏雄株的枝梢先端幼嫩葉片各100張，利用ISSR分子標記技術(shù)分析其遺傳多樣性，取得的研究結(jié)果主要有： 1、采用改良CTAB法提取的銀杏基因組DNA條帶清晰、完整、明亮，遷移率與入DNA相當(dāng)，DNA濃度最小為652 ng/μl，A260/A280最小為1.75，最大為1.94，DNA純度符合本研究ISSR-PCR擴增要求。 2、經(jīng)對影響銀杏雄株ISSR-PCR擴增效果的Taq酶、Mg2

3、+、dNTP和引物用量等4個因素分別設(shè)計4個處理水平，并應(yīng)用正交試驗設(shè)計[L16(44)]篩選和優(yōu)化，得到適于銀杏ISSR-PCR分析的優(yōu)化體系為：模板DNA50 ng、10×buffer2μl、Taq酶1.0 U、Mg2+2.5 mmol/L、dNTP0.20 mmol/L和引物0.4μmol/L。 3、經(jīng)用100個ISSR引物分別對91株銀杏雄株進行擴增，篩選得到12個擴增條帶較多、信號強、背景清晰的引物，其序列分別為(AC

4、)8CG，(CA)8AG，(AC)8SG，(AC)8GA，(AC)8GG，(GA)8A，(GA)8C，(CA)8GT，(GACA)4，(AC)8CA，(CT)8G，(AC)8 YG。 4、篩選的12個引物對供試91株銀杏雄株共擴增出94條DNA條帶，其中多態(tài)性DNA條帶56條，多態(tài)位點百分數(shù)(P)為59.57％，每個引物擴增條帶5-11條，片段大小為200-2000 bp。 5、供試91株銀杏雄株的平均有效等位基因數(shù)(N

5、e)為1.7149，平均基因多樣度為(H)0.3966，平均Shannon's信息指數(shù)(I)為0.5771，具豐富的遺傳多樣性。 6、供試91株銀杏雄株的個體間的Nei's距離在0.0443-0.9667之間，利用最長距離法進行系統(tǒng)聚類分析，取閾值為0.9434時，銀杏雄株可分為I、II兩類，其個體數(shù)分別為37和54；取閾值為0.6842時，銀杏雄株可分為1、2、3、4、5五類，綜合兩種閾值的分類結(jié)果，其1、2類可為隸屬于I類的

6、亞類，分別包括6個和31個雄株；其3、4、5類可為隸屬于II類的亞類，分別包括48個、2個和4個雄株。 7、揚州市區(qū)、徐州地區(qū)及揚州大學(xué)銀杏種質(zhì)資源圃三個銀杏雄株群體總的遺傳變異值(Ht)為0.3876，各群體內(nèi)遺傳變異值(Hs)為0.3470，不同群體間遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.1048，表明供試銀杏雄株的總遺傳變異中有10.48％的變異存在于群體間，而群體內(nèi)的遺傳變異為89.52％，明顯高于銀杏雄株群體間的遺傳變異。

7、 8、揚州市區(qū)、徐州地區(qū)、揚州大學(xué)銀杏種質(zhì)資源圃三個銀杏雄株群體的平均有效等位基因數(shù)(Ne)分別為1.7199、1.5916、1.5520，平均基因多樣度(H)分別為0.3964、0.3380、0.3066，平均Shannon's信息指數(shù)(I)分別為0.5760、0.4964、0.4473，其Ne、H、I的大小順序完全一致，銀杏雄株遺傳多樣性水平均為揚州市區(qū)>徐州地區(qū)>揚州大學(xué)銀杏種質(zhì)資源圃。 9、揚州市區(qū)、徐州地區(qū)、揚州大學(xué)