菊花高頻再生體系建立及農(nóng)桿菌介導(dǎo)FT基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、菊花是原產(chǎn)于我國(guó)的十大名花之一,但是絕大多數(shù)品種的菊花自然花期集中在11月左右,能夠在夏季或早秋開花的只有少數(shù)花色單調(diào)、花型較小的品種。因此菊花的生產(chǎn)發(fā)展因?yàn)槠浠ㄆ趩栴}受到了嚴(yán)重制約。FT基因是一個(gè)激酶抑制蛋白,可以通過對(duì)CO對(duì)FT的調(diào)節(jié)促進(jìn)開花。本試驗(yàn)旨在通過對(duì)菊花高效再生體系及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化體系的研究,將Fr基因?qū)氲骄栈ㄆ贩N‘神馬’中,以期獲得花期提前的菊花新品種,并為廣泛運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良菊花品種打下基礎(chǔ)。
　　

2、本研究以菊花品種‘神馬’為試驗(yàn)材料。研究了不同激素濃度配比對(duì)菊花直接誘導(dǎo)不定芽再生以及對(duì)生根誘導(dǎo)的影響,對(duì)菊花的再生條件進(jìn)行了優(yōu)化,從而獲得了菊花葉片高速快效的再生體系。試驗(yàn)結(jié)果表明,將菊花‘神馬’葉盤接種在MS+NAA1mg／L+6-BA1mg／L培養(yǎng)基上,經(jīng)過20天的組織培養(yǎng)后,可直接再生出不定芽,而且再生率高達(dá)95.5％,再生芽在1／2MS+NAA0.7mg／L培養(yǎng)基上經(jīng)過10天左右可誘導(dǎo)出根,生根率可達(dá)100％。在菊花品種‘神馬

3、’高效再生體系建立的基礎(chǔ)上,利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法對(duì)其遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了研究。研究結(jié)果表明,葉盤預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間以及延遲培養(yǎng)時(shí)間均對(duì)菊花的遺傳轉(zhuǎn)化效率有較大影響。同時(shí)得出經(jīng)過預(yù)培養(yǎng)12h的葉盤置于菌液侵染5min,黑暗共培養(yǎng)3d；延遲篩選3d時(shí)菊花遺傳轉(zhuǎn)化率最高。共培養(yǎng)后將葉盤接種到MS+NAA1mg／L+-6-BA1mg／L+Km20mg／L培養(yǎng)基上進(jìn)行抗性芽的篩選培養(yǎng)。25天后可直接分化出不定芽,當(dāng)不定芽長(zhǎng)到1-