鵝TSH-β基因的克隆、序列分析及其多態(tài)性與產(chǎn)蛋性能的關(guān)聯(lián)性.pdf

1、光周期對(duì)禽類季節(jié)性繁殖起調(diào)控作用，促甲狀腺激素(TSH)是啟動(dòng)禽類光周期反應(yīng)的重要因子，β亞基決定其生物活性。本研究以揚(yáng)州鵝為實(shí)驗(yàn)素材，首次克隆鵝TSH-β基因的全部序列，為進(jìn)一步研究TSH影響鵝產(chǎn)蛋性能的分子機(jī)理提供第一手資料，同時(shí)尋找與揚(yáng)州鵝產(chǎn)蛋性狀的TSH-β基因多態(tài)位點(diǎn)，為鵝蛋用性狀的分子標(biāo)記輔助選擇提供可參考的材料。結(jié)果如下： 1.首次在基因組水平上成功克隆了鵝TSH-β基因，共2420bp的序列，分別為200bp的5

2、’側(cè)翼區(qū)，65bp的外顯子1，876bp的內(nèi)含子1，163bp的外顯子2，782bp的內(nèi)含子2，324bp的外顯子3以及10bp的3’側(cè)翼區(qū)。同時(shí)，在5’側(cè)翼區(qū)定位了2個(gè)TATA框，2個(gè)垂體特異轉(zhuǎn)錄因子1結(jié)合位點(diǎn)，1個(gè)激活蛋白結(jié)合位點(diǎn)和1個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)等。所得序列均已上傳至genbank，基因登錄號(hào)分別為EU925400、EU939683、FJ393275和FJ797681。 2.序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，鵝TSH-β基因的外顯子1與鴨

3、、朱鷺的同源性是100％和95％，外顯子2與鴨、朱鷺、雞、鵪鵓、斑雀的分別為98％、96％、95％、92％和92％，外顯子3的分別為96％、93％、93％、90％和88％；內(nèi)含子1與朱鷺、雞的同源性分別為85％、77％，內(nèi)含子2與朱鷺、雞、斑雀的同源性分別達(dá)到75％、74％和60％。同時(shí)，推測(cè)出的蛋白序列與鴨、朱鷺、雞、鵪鶉、斑雀等的同源性分別達(dá)到99％、97％、96％、96％和94％。 3.根據(jù)鵝TSH-β基因設(shè)計(jì)了4對(duì)引物，

4、采用PCR-SSCP技術(shù)進(jìn)行了多態(tài)性檢測(cè)，并對(duì)其與46只揚(yáng)州鵝產(chǎn)蛋性能的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析。結(jié)果顯示：(1)引物I2檢測(cè)出多態(tài)現(xiàn)象，DNA直接測(cè)序后顯示，在intron2的第205到212位之間存在AACAACAGTGAATTCTGTGG或AGTTTAT兩種序列，形成AA、AB、和BB三種基因型，等位基因A和B的基因頻率分別為0.6596和0.3404。(2)經(jīng)最小二乘分析，BB型群體在一個(gè)產(chǎn)蛋周期內(nèi)的平均產(chǎn)量顯著高于AA型(P<0.05)