殼聚糖對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響及其調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、本論文共分6個(gè)試驗(yàn)研究了殼聚糖對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響及其免疫調(diào)節(jié)的機(jī)制。試驗(yàn)1～4利用體內(nèi)法，采用單因子隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，將180頭28日齡斷奶的、體型外貌相近的、健康的（杜×大×長(zhǎng)）三元雜交仔豬隨機(jī)分為5個(gè)日糧處理組，每個(gè)處理組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)（欄）6頭（3欄公豬、3欄母豬）。5種試驗(yàn)日糧是在基礎(chǔ)日糧中分別添加0、100、500、1000和2000 mg/kg的殼聚糖配制而成。試驗(yàn)期為28天，在試驗(yàn)期間仔豬自由采食、自由飲水。試驗(yàn)1研

2、究了殼聚糖對(duì)斷奶仔豬體液免疫和細(xì)胞免疫功能的影響。試驗(yàn)2研究了殼聚糖對(duì)斷奶仔豬應(yīng)激激素水平及抗氧化酶活力的影響，進(jìn)而從抗應(yīng)激和抗氧化的角度來(lái)探討殼聚糖對(duì)仔豬免疫功能的影響。試驗(yàn)3從一氧化氮(NO)途徑研究了殼聚糖對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響及其分子機(jī)制。試驗(yàn)4從花生四烯酸(AA)途徑研究了殼聚糖對(duì)斷奶仔豬免疫功能的影響及其分子機(jī)制。試驗(yàn)5和6利用體外法，進(jìn)一步研究不同濃度殼聚糖培養(yǎng)液對(duì)斷奶仔豬外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中NO（試驗(yàn)5）和

3、AA（試驗(yàn)6）途徑相關(guān)指標(biāo)的影響及其分子機(jī)制。
　　試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.日糧中添加殼聚糖可顯著提高斷奶仔豬血清中免疫球蛋白G(IgG)的濃度和特異性卵清白蛋白抗體(OVA-IgG)的含量（P＜0.05）。隨著殼聚糖的添加水平增加，仔豬回腸和空腸黏膜表面分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的濃度呈現(xiàn)顯著的一次或二次劑量增加效應(yīng)(P＜0.05)。殼聚糖顯著提高了斷奶仔豬血清中自介素1(IL-1)、白介素2（IL-2）和腫瘤壞死因子

4、-α(TNF-α)的濃度(P＜0.05)。此外，殼聚糖也可顯著降低血清中可溶性CD4(sCD4)和可溶性CD8(sCD8)的濃度(P＜0.05)。這表明日糧中添加殼聚糖可顯著地影響斷奶仔豬體液免疫和細(xì)胞免疫功能。
　　2.殼聚糖可顯著降低仔豬血清中促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和皮質(zhì)醇(COR)的濃度，并呈現(xiàn)顯著的一次或二次劑量依賴關(guān)系(P＜0.05)。隨著殼聚糖添加量的增加，仔豬血清中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧

5、化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的活力呈現(xiàn)顯著的一次或二次劑量增加效應(yīng)(P＜0.05)。提示殼聚糖可能通過緩減仔豬斷奶應(yīng)激、提高仔豬抗氧化能力，進(jìn)而促進(jìn)斷奶仔豬的免疫功能。
　　3.殼聚糖可顯著提高斷奶仔豬血清中NO的濃度和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的活力，也可顯著提高小腸中iNOS mRNA的相對(duì)表達(dá)量，并呈現(xiàn)一次或二次劑量依賴關(guān)系（P＜0.05）。這表明殼聚糖可能通過提高iNOS mRNA的卡相對(duì)表達(dá)量和酶活力來(lái)提高N

6、O的濃度進(jìn)而發(fā)揮其對(duì)機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能。殼聚糖的添加水平為500～1000mg/kg時(shí)，血清NO濃度、iNOS的活力及小腸中iNOS mRNA的相對(duì)表達(dá)量較高;當(dāng)日糧中殼聚糖添加量提高為2000 mg/kg時(shí)，上述指標(biāo)的值均呈不同程度的降低，這表明殼聚糖對(duì)其影響呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)。
　　4.日糧添加殼聚糖顯著提高了斷奶仔豬血清中AA、前列腺素E2(PGE2)和白三烯B4(LTB4)的濃度（P＜0.05），并顯著提高了仔豬血清中胞漿型

7、磷脂酶A2(cPLA2)、環(huán)氧合酶(COX-2)和脂氧化酶(5-LOX)的活性(P＜0.05)。此外，殼聚糖可顯著提高斷奶仔豬小腸中cPLA2、COX-2和5-LOX的mRNA相對(duì)表達(dá)量(P＜0.05)。這表明殼聚糖可能通過提高斷奶仔豬cPLA2、COX-2和5-LOX的酶活力及其mRNA相對(duì)表達(dá)量來(lái)提高仔豬血清中AA、PGE2和LTB4的濃度，進(jìn)而發(fā)揮其對(duì)斷奶仔豬AA途徑免疫調(diào)節(jié)功能。隨著日糧中殼聚糖添加水平的升高，上述各指標(biāo)的值呈現(xiàn)

8、顯著的二次曲線增加效應(yīng)，其中以添加量為500～1000 mg/kg時(shí)效果較好，但添加到2000 mg/kg時(shí)其促進(jìn)效果有降低趨勢(shì)，這表明殼聚糖對(duì)其影響存在劑量依賴關(guān)系。
　　5.在培養(yǎng)基中添加殼聚糖可以顯著提高斷奶仔豬PBMCs中NO的濃度、iNOS的酶活力及其mRNA相對(duì)表達(dá)量(P＜0.05)。為了確定上述試驗(yàn)中NO的升高是否主要由于iNOS活性的升高所導(dǎo)致，本試驗(yàn)在培養(yǎng)基中添加了iNOS的特異性抑制劑1400w，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加

9、1400w顯著抑制了NO濃度和iNOS活力，的升高（P＜0.05）。這表明殼聚糖可能是通過提高斷奶仔豬PBMCs中iNOS活力及其mRNA相對(duì)表達(dá)量進(jìn)而促進(jìn)了PBMCs中NO的生成。另外，殼聚糖顯著地抑制了由脂多糖(LPS)刺激的PBMCs中NO濃度、iNOS活力及其mRNA相對(duì)表達(dá)量的升高。這表明殼聚糖對(duì)斷奶仔豬PBMCs中NO濃度、iNOS活力及其mRNA相對(duì)表達(dá)量具有雙向調(diào)節(jié)功能。
　　6.隨著殼聚糖添加量的增加，PBMCs

10、培養(yǎng)液中cPLA2、COX-2和5-LOX的活力及AA、PGE2和LTB4濃度呈顯著的二次曲線升高（P＜0.05）;PBMCs中cPLA2、COX-2和5-LOX mRNA的相對(duì)表達(dá)量與殼聚糖添加量之間也呈現(xiàn)顯著的二次劑量增加效應(yīng)（P＜0.05）。另外，當(dāng)殼聚糖的添加量為80或160μg/mL時(shí)上述所有指標(biāo)的值均較高，然而殼聚糖的添加量增加到320μg/mL時(shí)上述各指標(biāo)的值有不同程度的降低。結(jié)果提示，殼聚糖能夠調(diào)節(jié)斷奶仔豬PBMCs中A