內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、胰島素抵抗與鵝肥肝形成的關(guān)系研究.pdf

1、非酒精性脂肪肝（Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）的日漸流行給人類的健康造成了巨大威脅。隨著相關(guān)研究的增多，對(duì)人類及哺乳類模式動(dòng)物NAFLD形成機(jī)制的認(rèn)識(shí)已取得較大的進(jìn)展。研究表明哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ERS)對(duì)胰島素抵抗(Insulin resistance，IR)的形成十分重要，而IR可誘發(fā)高胰島素血癥，將促進(jìn)肝臟中的脂肪合成。

2、相對(duì)于哺乳動(dòng)物，作為重要禽產(chǎn)品的鵝肥肝，有關(guān)其形成機(jī)制的研究和認(rèn)識(shí)還相當(dāng)匱乏。鵝與哺乳類動(dòng)物在進(jìn)化樹上存在較大的遺傳距離，在營(yíng)養(yǎng)代謝特別是脂肪代謝方面有些不同的特點(diǎn)。因此，作為哺乳動(dòng)物NAFLD重要形成機(jī)制的ERS和IR是否同樣適用于鵝肥肝還不清楚。本試驗(yàn)圍繞這一關(guān)鍵問題在細(xì)胞與活體兩個(gè)層面上展開研究:鵝原代肝細(xì)胞在高能營(yíng)養(yǎng)因子（高葡萄糖和高飽和脂肪酸）刺激后，檢測(cè)ERS標(biāo)記基因（如Grp78和Xbp1）在這些細(xì)胞中的mRNA水平;采用

3、藥物和強(qiáng)制飼喂兩種方式處理鵝一定時(shí)間后，對(duì)試驗(yàn)鵝進(jìn)行血糖、葡萄糖耐受試驗(yàn)、胰島素耐受試驗(yàn)、剖檢以及基因表達(dá)分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1、高能營(yíng)養(yǎng)因子的刺激可誘導(dǎo)鵝原代肝細(xì)胞產(chǎn)生ERS。本研究利用高能營(yíng)養(yǎng)因子（高葡萄糖和高飽和脂肪酸）處理鵝原代肝細(xì)胞，并在此基礎(chǔ)上添加不飽和脂肪酸（如油酸、亞油酸），熒光定量PCR檢測(cè)ERS標(biāo)記基因-Grp78和Xbp1的mRNA水平。結(jié)果顯示高葡萄糖和高棕櫚酸處理鵝原代肝細(xì)胞后，Grp78和Xb

4、p1的mRNA水平都有不同程度的上調(diào)，表明高能營(yíng)養(yǎng)因子能誘導(dǎo)鵝原代肝細(xì)胞產(chǎn)生ERS;油酸和亞油酸處理細(xì)胞后，棕櫚酸所誘導(dǎo)的Grp78和Xbp1的mRNA表達(dá)增加受到明顯抑制（P＜0.05）。以上結(jié)果說明，高能營(yíng)養(yǎng)因子可引起鵝原代肝細(xì)胞產(chǎn)生ERS，而不飽和脂肪酸可抑制這種誘導(dǎo)。
　　2、藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的ERS可引起鵝全身性IR和脂肪肝的形成。本試驗(yàn)選用兩種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑即衣霉素和毒胡蘿卜素（主要作用于肝臟），處理?yè)P(yáng)州鵝20 d，并對(duì)

5、試驗(yàn)鵝進(jìn)行血糖、葡萄糖耐受試驗(yàn)、剖檢分析以及檢測(cè)Grp78和Xbp1在肝臟中的mRNA水平。結(jié)果顯示相對(duì)于對(duì)照組，Grp78和Xbp1在衣霉素肝臟中的mRNA表達(dá)水平極顯著上調(diào)(P＜0.01);20天衣霉素飼喂也引起鵝對(duì)葡萄糖耐受能力明顯下降，且鵝肝也從深紅色轉(zhuǎn)變?yōu)橹靖蔚耐咙S色，這表明ERS可引起鵝產(chǎn)生IR，并促進(jìn)脂肪肝的形成;毒胡蘿卜素注射試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)衣霉素試驗(yàn)的結(jié)論。
　　3、填肥可引起鵝IR和脂肪肝形成，但并不通過

6、ERS的途徑。對(duì)70日齡朗德鵝進(jìn)行正常或強(qiáng)制飼喂，在77和84日齡對(duì)禁食的試驗(yàn)鵝進(jìn)行GTT試驗(yàn)，并在85日齡時(shí)測(cè)定了未禁食試驗(yàn)鵝的血糖水平，在88日齡禁食的試驗(yàn)鵝進(jìn)行ITT試驗(yàn)以及在強(qiáng)制飼喂一段時(shí)間后，屠宰部分試驗(yàn)鵝取肝樣用于檢測(cè)ERS標(biāo)記基因的mRNA水平。結(jié)果表明相對(duì)于正常飼養(yǎng)的對(duì)照組，填肥沒有誘導(dǎo)ERS，可能與脂肪酸去飽和酶的上調(diào)有關(guān)。不過，填肥鵝在強(qiáng)制飼喂7天后就開始出現(xiàn)葡萄糖耐受能力下降的現(xiàn)象。在14天時(shí)，這種現(xiàn)象更加明顯。在