甜菜谷氨酰胺合成酶基因啟動子的克隆.pdf

1、在植物的生長發(fā)育過程中，氮素的同化是一個十分重要的生理過程。其中，無機氮必須同化為有機氮才能為植物體所吸收和利用。谷氨酰胺合成酶(GS)是參與這一同化過程的關鍵酶。 啟動子是DNA鏈上可以與RNA聚合酶特異結合的部位。啟動子活性分析是一種非常重要的研究相關基因功能和時空特性性表達特征的手段。 本實驗的目的是從甜菜中克隆GS基因啟動子片段。以甜菜葉片為材料，提取其基因組DNA為模板。根據已知區(qū)域設計特異性引物，進行PCR擴

2、增。將PCR產物克隆到T載體中，轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞，然后測序。此實驗利用LA-PCR克隆得到了甜菜谷氨酰胺合成酶基因的起始密碼子上游的828bp啟動子序列。利用在線生物信息學軟件TSSP和PLACE分析該序列，分析結果表明甜菜谷氨酰胺合成酶基因啟動子區(qū)TATA—BOX位于起始位點上游的25—30區(qū)段，該序列包含有36個可能的順式作用元件。 本實驗分離GS基因的調控區(qū)，GS基因的表達調控研究及實現甜菜高同化氨途徑奠定了分子生物