豬鏈球菌2型疫苗候選株的生物學特性研究.pdf

1、豬鏈球菌分35種血清型，其中豬鏈球菌2型（Streptococcus suis serotype2，SS2）流行最廣，發(fā)病率最高，而且可感染人致死，是一種重要的人畜共患病病原。由SS2引起的豬鏈球菌病常呈散發(fā)或地方性爆發(fā)，發(fā)病率和死亡率均很高，嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。目前，豬鏈球菌2型疫苗研制大多集中在基因工程疫苗上，但由于豬鏈球菌2型致病因子復雜，單獨以一種或幾種毒力因子制成的亞單位苗不能起到完全的免疫保護作用。因此，滅活疫苗仍然有著不

2、可替代的作用。研制出一種免疫原性好，副作用小的的滅活疫苗對日益增多的豬鏈球菌2型引起的鏈球菌病的預防有著重要意義。
　　 為了篩選出生物學特性較為穩(wěn)定的疫苗候選株，選取豬鏈球菌2型的7種主要毒力因子設計并合成引物，用PCR方法對四株豬鏈球菌2型分離株進行檢測。將各菌株連續(xù)傳代培養(yǎng)至20代，用API20 Strep生化鑒定試劑條和全自動生化分析儀對同一菌株各代次之間進行比較鑒定。結果顯示，除SS2 BB071118株缺乏orf2外

3、，其他分離株均同時具有被檢測的7種毒力因子，屬于豬鏈球菌2型高致病菌株；生化試驗結果表明，除了SS2 HA060821株高度穩(wěn)定外，其他菌株個代次之間均存在不同程度的差異，因此最終確定SS2 HA060821為疫苗候選菌株。
　　 以斑馬魚作為豬鏈球菌2型感染的動物模型，對SS2 HA060821株F1代和F20代菌株進行致病性比較。斑馬魚經(jīng)腹腔注射接種F1代和F20代不同稀釋度菌液，統(tǒng)計一周內(nèi)斑馬魚死亡數(shù)量。結果顯示，攻毒后死

4、亡的斑馬魚具有典型的細菌性敗血癥病理變化，腹腔可分離到SS2菌株。HA060821株F1代和F20代菌株對斑馬魚的LD50分別為8.9×104 CFU和9.5×104 CFU，統(tǒng)計學分析結果表明二者毒力差異不顯著（P>0.05）。證明SS2 HA060821株經(jīng)過20代傳代培養(yǎng)后毒力仍然穩(wěn)定，因此建立了SS2HA060821株F1代和F20代基礎種子批次，作為滅活疫苗的研究對象。
　　 為評價豬鏈球菌2型HA060821株制備的

5、滅活疫苗對豬的免疫保護效力，將25頭豬隨機分成5組，分別用HA060821 F1、F20滅活疫苗，HA9801 F1、F20滅活疫苗和PBS對豬進行免疫，并用ZY05719強毒株進行效力檢驗；同時設立免疫HA060821滅活疫苗的抗體監(jiān)測組，用間接ELISA法檢測HA060821滅活疫苗免疫豬的抗體水平。結果顯示監(jiān)測組在第7天抗體均呈陽性，其中一次免疫組在第28天抗體效價達高峰；二次免疫組在第42天抗體水平達到高峰，抗體效價分別為1:3