鱖魚JAK、STAT家族的分子克隆和JAK-STAT通路功能的初步鑒定.pdf

1、鱖魚(Siniperca chuatsi)是我國重要的魚類養(yǎng)殖品種，具有較大經濟價值。但養(yǎng)殖面積和密度的不斷增加，使得養(yǎng)殖水環(huán)境日趨惡化，鱖魚病害頻頻爆發(fā)，帶來經濟損失，還制約鱖魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。JAK—STAT信號轉導通路是機體抗病毒免疫中重要的途徑之一，在生長、發(fā)育、免疫、凋亡等方面發(fā)揮著重要作用。為了更好的研究鱖魚先天性免疫機制，通過設計簡并引物釣出JAK家族中4個基因和STAT家族中5個基因的表達序列標簽(EST)。 通過

2、快速擴增cDNA末端(Rapid amplification of cDNA ends，RACE)技術，克隆得到鱖JAK、STAT家族成員的全長cDNA序列。其中JAK2、TYK2、STAT6的cDNA序列是在魚類中首次克隆得到。通過對氨基酸序列進行比對分析，發(fā)現鱖魚的JAK、STAT家族基因和高等脊椎動物相對應的基因同源性較高，且具有相似的結構域，推測可能有相似功能機制。構建進化樹進行分析發(fā)現，JAK、STAT家族成員分別與魚類及其他

3、脊椎動物的對應蛋白聚類在一起，表明在魚類分化以前，JAK、STAT家族各成員已經發(fā)生了分化。 應用實時熒光定量PCR技術，分析了JAK、STAT家族成員在健康魚中的組織分布。組織分布結果顯示，除了肌肉，大部分被檢測的器官中皆有JAK、STAT轉錄本的表達。JAK1、JAK2在性腺中表達量最高，JAK3主要分布在鰓，而TYK2主要分布在腦。STAT1和STAT6在脾中表達量最高，而STAT3在性腺中表達高，STAT4在鰓，STAT

4、5在肝。 哺乳動物在抗病毒的免疫反應中，會利用干擾素激活JAK—STAT信號轉導通路，調控多種抗病毒、介導細胞凋亡的相關基因表達，干擾病毒入侵、轉錄、復制、翻譯、成熟、裝配及釋放等多個環(huán)節(jié)以抵抗病毒感染。為了研究鱖魚JAK—STAT信號轉導通路在抗病毒方面作用，我們利用poly I：C(干擾素誘導劑)刺激ISKNV敏感的鱖仔魚細胞MFF-1，發(fā)現鱖魚JAK—STAT通路被激活，下游SOCS1、Mx、IRF-1表達明顯上調，表明它