甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病拮抗菌P-13菌株鑒定及其抑菌物質(zhì)的研究.pdf

1、甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的病原菌包括細(xì)菌性果腐病菌（Acidovorax avenae subsp.citrull）和細(xì)菌性角斑病菌（Pseudomonas syringae pv.Lachrymans），該病已成為近年來影響新疆甜瓜生產(chǎn)的重要因素。因此，探索防治甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病的有效方法已成為重要課題。本實驗室已從新疆甜瓜根際土壤中分離到一株甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病拮抗菌P-13，瓊脂擴(kuò)散法生物活性研究表明，其發(fā)酵液對細(xì)菌性果腐病菌BFB、細(xì)菌性角斑

2、病菌P4的抑菌圈直徑分別為19 mm和17 mm以上。本文對其分類地位、搖瓶發(fā)酵條件和發(fā)酵液中抑菌物質(zhì)的性質(zhì)及其初步分離純化進(jìn)行研究。結(jié)果如下： 1.明確了甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病拮抗菌P-13的屬。根據(jù)形態(tài)特征、生理特性測定和16S rRNA序列的系統(tǒng)發(fā)育分析，初步鑒定菌株P(guān)-13為婁徹氏鏈霉菌（Streptomyces rochei）。 2.明確了菌株P(guān)-13發(fā)酵液中抑菌物質(zhì)的性質(zhì)。甜瓜細(xì)菌性斑點(diǎn)病拮抗菌P-13發(fā)酵液中抑菌

3、物質(zhì)主要為胞外代謝產(chǎn)物，不溶于石油醚、乙醚和乙酸乙酯等有機(jī)溶劑。進(jìn)而對該物質(zhì)穩(wěn)定性進(jìn)行研究，在100℃處理10 min、pH6處理6h或紫外線照射7h，該物質(zhì)抑菌活性不變。紙層析結(jié)果表明，該物質(zhì)主要為堿性水溶性物質(zhì)。 3.探索了菌株P(guān)-13產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的培養(yǎng)基組成、培養(yǎng)基初始pH、搖瓶裝液量、接種量、發(fā)酵溫度和發(fā)酵時間等搖瓶發(fā)酵條件。采用Plackett-Burman設(shè)計、最陡爬坡試驗設(shè)計、旋轉(zhuǎn)中心組合設(shè)計和響應(yīng)面分析法優(yōu)化培養(yǎng)

4、基組成，最優(yōu)培養(yǎng)基組成為葡萄糖15 g/L、可溶性淀粉5 g/L、蛋白胨3 g/L、（NH4）2SO43.206 g/L、CaCO36 g/L、K2HPO4·3H2O0.6 g/L、MgSO4·7H2O0.6 g/L、NaCl0.158 g/L、FeSO4·7H2O0.006 g/L和ZnSO4·7H2O0.002 g/L。單因素試驗確定最佳搖瓶發(fā)酵條件為培養(yǎng)基初始pH7.0、搖瓶裝液量60 mL/500 mL、接種量4％（V/V）、發(fā)

5、酵溫度28℃和發(fā)酵時間5.0d，發(fā)酵液抑菌圈直徑為30.51 mm；比初始值21.17 mm提高了44.12％。通過試驗設(shè)計對發(fā)酵培養(yǎng)基和搖瓶發(fā)酵條件的優(yōu)化，抑菌活性顯著提高。 4.離子交換法研究表明，采用弱酸性陽離子樹脂D152，使抑菌物質(zhì)得到了富集和濃縮。離子交換法操作條件如下：發(fā)酵液經(jīng)過預(yù)處理后，以90 mL/h流速上裝好的NH4+型樹脂D152離子交換柱，上柱時發(fā)酵液與樹脂的體積比為8：1；用蒸餾水以6倍樹脂體積的蒸餾水