蒙古綿羊Ghrelin cDNA的克隆和原核表達(dá).pdf

1、Ghrelin是Kojima等1999年發(fā)現(xiàn)的生長激素促分泌素受體(GHSR)的第一個(gè)內(nèi)源性配體，Ghrelin除調(diào)節(jié)生長激素分泌外，還有增加食欲，調(diào)節(jié)能量平衡，促進(jìn)胃酸分泌等作用。根據(jù)Genbank中檢索羊prepro Ghrelin mRNA序列，設(shè)計(jì)了蒙古綿羊Ghrelin原核表達(dá)引物。通過RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增 Ghrelin cDNA，將其與pMD-19T Vector連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌經(jīng)鑒定正確后，回收目的片段與原核表達(dá)載體p

2、ET-32a(+)相連接，并轉(zhuǎn)化BL21(DE3)大腸桿菌。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后進(jìn)行SDS-PAGE和Western-blot分析。結(jié)果顯示克隆的蒙古綿羊 Ghrelin cDNA序列與已發(fā)表序列有兩個(gè)堿基的差異，該堿基的變化并不影響氨基酸序列，目的蛋白主要以可溶性形式存在，Western-blot初步證實(shí)了所獲的融合蛋白是特異的，結(jié)果表明成功構(gòu)建了蒙古綿羊Ghrelin基因的原核表達(dá)載體，并在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)，為進(jìn)一步研究蒙古綿羊G