口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白的分段表達(dá)及免疫試驗研究.pdf

1、口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的豬、牛、羊等偶蹄動物的一種急性接觸性傳染病，并能形成大范圍流行，給流行國家和地區(qū)造成巨大損失。疫苗免疫是目前以至將來防控口蹄疫的主要策略之一。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展及對口蹄疫病毒基因組結(jié)構(gòu)與功能的深入了解，基因工程疫苗已成為口蹄疫疫苗研發(fā)的主要方向之一。把FMDV基因組中具有主要抗原位點的基因進(jìn)行原核表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物純化后用于疫苗研制，為今后亞單位疫苗的開發(fā)提供了基礎(chǔ)。 本研究以O(shè)型口

2、蹄疫病毒為研究對象，克隆了O型FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VPO、VP1、VP3編碼基因，然后構(gòu)建了結(jié)構(gòu)蛋白VP0、VP1、VP3的克隆載體和表達(dá)載體，利用DNAstar軟件預(yù)測了三種蛋白的抗原位點。通過對表達(dá)條件的優(yōu)化，最后確定三種結(jié)構(gòu)蛋白均以包涵體的形式表達(dá)，包涵體通過NTA His Bind親和層析法進(jìn)行純化后用透析的方法對蛋白進(jìn)行復(fù)性，蛋白濃縮、定量后，免疫小白鼠后獲得抗血清，經(jīng)Western-blot證明具有抗原性，即可誘導(dǎo)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體

3、。 定量后蛋白樣品用雙抗夾心ELISA法進(jìn)行檢測，結(jié)果表明測得樣品的0D值均小于陽性對照值，而大于陰性對照值，而樣品2組值即VP1的抗體產(chǎn)生的水品均高于其它樣品。這與FMDV的結(jié)構(gòu)蛋白中，VP1主要功能區(qū)內(nèi)包含了FMDV主要的抗原位點，能誘導(dǎo)感染動物產(chǎn)生中和抗體的結(jié)論是相一致的。另外，分段表達(dá)的結(jié)構(gòu)蛋白將它們兩兩等摩爾混合或者三種蛋白等摩爾混合均不能提高它的抗體產(chǎn)生水平，即混合抗原沒有相互交叉作用，而使其產(chǎn)生抗體水平提高的作用。