枇杷小種子植株遺傳多樣性的RAPD分析.pdf

1、本研究采用RAPD技術(shù)對100份枇杷小種子植株個體材料、1份母株材料以及1份母株砧木材料進行變異性和遺傳多樣性分析。首先對枇杷基因組DNA的提取方法進行了改良，以獲得高質(zhì)量的基因組DNA，用于RAPD分析。然后對枇杷RAPD反應(yīng)體系體系進行優(yōu)化，建立最佳RAPD擴增體系，篩選出適合枇杷RAPD分析的隨機引物并進行PCR擴增。對樣品的RAPD圖譜及數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。研究結(jié)果如下： (1)本試驗采用改良CTAB法，成功地從新鮮和硅膠

2、保存的枇杷嫩葉中提取DNA，產(chǎn)率較高，OD260/OD280為1.80-2.05范圍內(nèi)，符合RAPD分析的要求。通過瓊脂糖凝膠電泳分析，提取的DNA質(zhì)量高，完整性好。 (2)優(yōu)化了枇杷RAPD最佳反應(yīng)體系：PCR擴增的總體積為25μL，包括50ng的模板DNA，10×PCRbuffer2.5μL,2.0mmol/L，MgCl2，0.2mmol/LdNTP，0.3μmol/L引物，Taq酶1.2U。擴增程序為：94℃預(yù)變性4min

3、，94℃變性1min，38℃退火1.5min，72℃2min，45個循環(huán)后在72℃延伸10min，結(jié)束后在4℃條件下保存。最后用2.0％的瓊脂糖凝膠電泳檢測其擴增產(chǎn)物。 (3)采用優(yōu)化后的反應(yīng)體系對120個引物進行篩選，經(jīng)過三次重復(fù)，篩選出多態(tài)性和擴增重復(fù)性好、譜帶清晰且較多的9個引物。 (4)利用9個篩選出的RAPD引物對枇杷小種子植株群體、母株及其砧木材料進行擴增，研究群體的遺傳多樣性。共產(chǎn)生100條譜帶，其中83條

4、為多態(tài)性帶，占83％，平均每個引物擴增的DNA帶數(shù)為11.11條，多態(tài)性帶9.22條。根據(jù)擴增結(jié)果建立了個體間親緣關(guān)系的UPGMA聚類圖，將102份單株劃分為5大類。 (5)通過POPGENE321.32軟件的分析，獲得了枇杷小種子植株群體Nei基因多樣度指數(shù)和Shannon多樣性信息含量指數(shù)。枇杷小種子植株群體內(nèi)遺傳多樣性較高，同時，存在大量的變異單株，為枇杷選育種提供了豐富的原材料，為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。 (6)分析