高致病性PRRSV GD強弱毒感染豬外周血淋巴細胞亞群的變化及雙重?zé)晒舛縍T-PCR鑒別方法的建立.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的各個年齡的豬的繁殖與呼吸障礙疾病。PRRS對養(yǎng)豬業(yè)危害很大，經(jīng)濟損失可觀，世界動物衛(wèi)生組織將其列為必須報告的疫病，我國將其列為二類動物疫病。在我國，HP-PRRSV弱毒疫苗的研制與運用為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征的防控發(fā)揮了重要的作用。但是對PRRSV弱毒疫苗的免疫機理的研究鮮有報道。本研究運用血常規(guī)技術(shù)和流式細胞技術(shù)分析了PRRSV感染SPF豬后，豬體內(nèi)外周血

2、淋巴細胞亞群變化，從細胞水平探討PRRSV GD強弱毒感染對外周血淋巴細胞亞群的影響。從免疫學(xué)的方面探討PRRSV弱毒疫苗對豬體的影響，從而為疫苗的研制提供參考。
　　 PRRSV疫苗研制出來后與強毒株的鑒別問題勢在必行。根據(jù)Genbank中登錄的39株高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)全基因序列和PRRSV疫苗株(GDr180株)全基因序列的比對結(jié)果，在PRRSV Nsp2和Orf7基因的保守區(qū)找到可區(qū)分鑒別PRRS

3、V GDr180株與其他PRRSV毒株的特異性位點，通過設(shè)計MGB探針，建立了雙重實時熒光定量RT-PCR方法。通過對PRRSVGDr180株和GD強毒株病毒液、感染豬血清和組織樣品檢測證明了該方法的可行性；用雙重實時熒光定量RT-PCR方法檢測PRRSV GDr180株病毒液時，其敏感性達到19.4copies/μL，在檢測GD強毒株時敏感性達到34.2copies/μL，證明了該方法具有良好的敏感性；通過對PRRSV其他8個毒株的檢