七種雙殼貝類染色體核型及熒光原位雜交研究.pdf

1、本研究應用核型分析技術和熒光原位雜交(flourescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)技術，對四種珍珠貝及三種牡蠣染色體進行了染色體核型分析及FISH分析。主要結果如下：
　　 1、以牡蠣鰓細胞為材料，采用PHA處理法、低溫同步化法及活體去殼法進行預處理，制作成體染色體標本；以馬氏珠母貝擔輪幼蟲為材料，采用PHA促繁殖獲取胚胎法，制作胚胎染色體標本。對不同時間不同處理方式獲得牡蠣染色體分裂相比例、

2、PHA促繁殖獲取胚胎法獲得馬氏珠母貝染色體分裂相比例進行統(tǒng)計。結果發(fā)現(xiàn)，PHA處理法在24h時能獲取最多分裂相(3.5‰)，低溫同步化法在72h時能獲得最多分裂相(2.2‰)，活體去殼法始終保持較高分裂相比例(3.6‰)，PHA促繁殖獲取胚胎法獲得最大分裂相比例(10‰)。四種方法都能獲得理想的中期分裂相數(shù)目。其中，低溫同步化法缺點是溫度難控制、預處理時間長；活體去殼法易導致貝類死亡；PHA促受精獲取胚胎法缺點是胚胎的獲取受繁殖季節(jié)限制

3、。PHA處理法預處理時間短、獲取分裂相數(shù)目多，無疑是貝類成體染色體制備的最好方法。同時，PHA也為貝類人工繁殖提供了一種更為有效的手段。
　　 2、分析了四種珍珠貝及三種牡蠣染色體核型。結果發(fā)現(xiàn)，四種珍珠貝染色體眾數(shù)均為28。馬氏珠母貝(Pinctada martensii)核型公式為2n=14m+12sm/st+2t，NF=54；黑珠母貝(P. nigra)核型公式為2n=4m+4sm+20t，NF=36；斑珠母貝(P. ma

4、cula)核型公式為2n=28t，NF=28；企鵝珍珠貝(Pteria penguin)核型公式為2n=4m+24t，NF=32。鑒于四種珍珠貝染色體組型的相似性，可以認為他們的親緣關系比較接近，如果進行種間雜交，雜交成功和產生雜交后代的可能性非常大。三種牡蠣染色體眾數(shù)均為20。齒牡蠣(Dendistrea.folium)核型公式為2n=10m+10sm，NF=40；牡蠣(Crassostrea sp.)核型公式為2n=20m，NF=4

5、0；咬齒牡蠣(Saccostrea mordax)核型公式為2n=20m，NF=40。差異主要出現(xiàn)在對中部、亞中部著絲粒染色體；端部、亞端部著絲粒染色體這些形態(tài)比較類似的染色體的判斷上。造成這種差異可能存在如下原因：1、實驗方法不同，秋水仙素處理的時間不同，導致染色體伸展程度的差異；2、實驗材料不同，有的以鰓組織為材料，有的以早期胚胎等為材料；3、所取材料屬于不同的地理種群；4、在后期分析過程中，人為判斷染色體著絲點位置的主觀影響，均可

6、能造成染色體分類的差異。
　　 3、研究了重復序列在七種雙殼貝類染色體上的定位。采用順序熒光原位雜交技術，對同一個染色體標本進行標記。結果發(fā)現(xiàn)，脊椎動物端粒序列(TTAGGG)10在七種雙殼貝類的每一條染色體臂的端部區(qū)域都檢測到較強黃綠色熒光信號。在染色體中部未被檢測到，推測近期并未發(fā)生染色體重排或末端融合。
　　 18S-28S rDNA在馬氏珠母貝染色體上檢測到兩簇熒光信號，位于第8號染色體短臂近端粒區(qū)域；在黑珠母貝

7、染色體上檢測到兩簇熒光信號，位于第3號染色體短臂近端粒區(qū)域：在斑珠母貝染色體上檢測到兩簇熒光信號，位于第3號染色體臂的近端粒區(qū)域；在企鵝珍珠貝染色體上檢測到四簇熒光信號，分別位于第1號染色體及第9號染色體臂的近端粒區(qū)域。在齒牡蠣染色體上檢測到兩簇熒光信號，位于第3號染色體臂的近端粒區(qū)域；在牡蠣染色體上檢測到兩簇熒光信號，位于第3號染色體臂的近端粒區(qū)域；在咬齒牡蠣染色體上檢測到兩簇熒光信號，位于第3號染色體臂的近端粒區(qū)域。推測僅具有-個1

8、8S-28S rDNA位點的珠母貝屬的馬氏珠母貝、黑珠母貝及斑珠母貝較具有兩個位點的珍珠貝屬的企鵝珍珠貝可能具有更古老的進化地位。
　　 5S rDNA在七種貝中均檢測到兩簇熒光信號。在馬氏珠母貝中，位于第10號染色體長臂中間區(qū)域；在黑珠母貝中，位于第4號染色體長臂中間區(qū)域；在斑珠母貝中，位于第4號染色體臂的中間區(qū)域；在企鵝珍珠貝中，位于第1號染色體臂的中間區(qū)域。在齒牡蠣中，位于第2號染色體臂的中間區(qū)域；在牡蠣染色體中，位于第2