家蠶載脂蛋白Apolipophorin-Ⅲ識(shí)別功能的初步研究.pdf

1、昆蟲Apolipophorin-Ⅲ(ApoLp-Ⅲ)屬載脂蛋白家庭成員，近期有研究表明該蛋白為多功能蛋白，在昆蟲免疫信號(hào)識(shí)別中也發(fā)揮病原識(shí)別的功能。本研究以家蠶(Bombyx mori) P50來源的ApoLp-Ⅲ為研究對(duì)象，將apoLp-Ⅲ和gfp基因融合后在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá)，用親和層析純化ApoLp-Ⅲ-GFP融合蛋白，對(duì)ApoLp-Ⅲ-GFP融合蛋白進(jìn)行功能研究，為ApoLp-Ⅲ在昆蟲免疫系統(tǒng)的信號(hào)識(shí)別轉(zhuǎn)導(dǎo)中的

2、研究提供了新的證據(jù)。 已報(bào)道家蠶P50 ApoLp-Ⅲ的mRNA序列(Genbank登錄號(hào)：U59244)長623bp，ORF編碼186個(gè)氨基酸(aa)，軟件分析和文獻(xiàn)報(bào)道有兩種不同長度的信號(hào)肽，從N端開始分別為17個(gè)氨基酸和22個(gè)氨基酸進(jìn)行C-末端GFP融合表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)去除不同信號(hào)肽的原核表達(dá)都很好。SDS-PAGE和western bloting驗(yàn)證，ApoLp-Ⅲ-GFP獲得正確的表達(dá)，為了驗(yàn)證ApoLp-Ⅲ蛋白的病原模

3、式識(shí)別功能，將親和層析純化的GFP融合蛋白分別與構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)、金龜子綠僵菌(Metarhizium anisopliae)、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)和釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等微生物細(xì)胞進(jìn)行結(jié)合試驗(yàn)，用熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)ApoLp-Ⅲ蛋白與