干旱脅迫條件下花生葉片蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、植物在其生長(zhǎng)過(guò)程中經(jīng)常會(huì)遭受到不同程度的生物和非生物逆境脅迫，這些脅迫嚴(yán)重影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育，并對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成極大的負(fù)面影響。花生是重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物。我國(guó)是世界上種植花生的主要國(guó)家之一，花生產(chǎn)區(qū)主要分布于干旱和半干旱地區(qū)。干旱嚴(yán)重影響花生的產(chǎn)量和品質(zhì)，是花生生產(chǎn)的首要限制因子。我國(guó)有70％的花生面積受到不同程度的干旱危害，平均減產(chǎn)20％以上，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，解決干旱對(duì)花生生產(chǎn)的影響是當(dāng)務(wù)之急。
　　蛋白質(zhì)組學(xué)可以

2、研究許多基因組水平上無(wú)法體現(xiàn)的層面，如:基因表達(dá)的翻譯水平、翻譯后的各種蛋白質(zhì)修飾以及蛋白質(zhì)的相互作用等。近年來(lái)，植物蛋白質(zhì)組學(xué)的研究日益增多，主要集中在擬南芥、水稻等模式植物上，研究范圍包括在非生物因子的環(huán)境脅迫條件下的生理變化，如干旱、高鹽、缺氧、ABA處理和機(jī)械損傷等，生物因子如菌根真菌以及與植物共生關(guān)系的根瘤菌對(duì)植物生長(zhǎng)的影響。還有植物組織器官如根、莖、葉、花、果實(shí)、種子發(fā)育過(guò)程中的蛋白質(zhì)變化。此外植物蛋白質(zhì)組學(xué)研究已經(jīng)深入到亞

3、細(xì)胞水平，即研究在一個(gè)細(xì)胞器內(nèi)表達(dá)的蛋白質(zhì)組，這些細(xì)胞器包括葉綠體、線粒體、內(nèi)膜系統(tǒng)等，而且還涉及植物群體遺傳方面，包括基因多樣性和表型多樣性之間的關(guān)系，基因突變引起的蛋白質(zhì)表達(dá)變化，植物激素的信號(hào)傳導(dǎo)和作用機(jī)理等方面。
　　花生是重要的油料作物，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，為異源四倍體植物，基因組龐大(約2.8×109 bp)，其蛋白質(zhì)組學(xué)的研究尚處于起步階段。
　　本研究以花生品種魯花14為實(shí)驗(yàn)材料，PEG6000模擬干旱環(huán)境，

4、提取葉片可溶性蛋白進(jìn)行雙向電泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基礎(chǔ)上，對(duì)樣品抽提、樣品溶解、膠條 pH范圍選擇、蛋白上樣量、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳等關(guān)鍵步驟進(jìn)行改進(jìn)，獲得了蛋白點(diǎn)較多、重復(fù)性好的雙向電泳圖譜?；ㄉ~片蛋白質(zhì)雙向電泳選用pH4-7的IPG膠條，采用考馬斯亮藍(lán)染色法，在上樣量為280μg時(shí)，得到效果較佳的電泳圖譜。2-DE圖譜上蛋白點(diǎn)數(shù)量約480個(gè)，圖像清晰，蛋白點(diǎn)無(wú)明顯拖尾現(xiàn)象，這為開(kāi)展花生葉片蛋白質(zhì)組研究奠定了基礎(chǔ)。經(jīng)