豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1～6基因核苷酸變異的研究.pdf

1、豬的生長發(fā)育和肉質(zhì)性狀是養(yǎng)豬生產(chǎn)中兩個重要的經(jīng)濟性狀，關(guān)系到養(yǎng)豬生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。畜禽的生長發(fā)育是一個復(fù)雜的生理生化過程，受多因素的影響，其中遺傳因素在影響畜禽生長發(fā)育過程的貢獻(xiàn)率一般為40％，有時高達(dá)60％。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和應(yīng)用，已通過基因組掃描和候選基因策略，分離、定位和克隆了一些與豬生長發(fā)育密切相關(guān)的候選基因或數(shù)量性狀位點(QuantitativeTraitLoci，QTLs)。神經(jīng)內(nèi)分泌生長軸是指動物體內(nèi)從下丘腦、垂體到靶器

2、官由一系列與動物生長發(fā)育密切相關(guān)的激素及受體所組成的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)。在調(diào)節(jié)GH/IGFs生長軸中，IGFBPs扮演著重要的作用。本研究以豬的IGFBP-1-6基因作為影響豬生長發(fā)育和肉質(zhì)性狀的候選基因，分析了基因及其在染色體上定位，克隆了基因的部分序列；并采用PCR-SSCP技術(shù)分析了不同基因的基因型和等位基因的頻率在不同中外品種的分布，采用單位點和單體型的多重比較探討了不同基因與生產(chǎn)性狀的相關(guān)性。結(jié)果表明： 1.在IGFBP-

3、1基因中檢測到了三個SNP，分別是A6181C、C5844T和G1981C。其中C5844T的突變位于外顯子4中，但沒有造成氨基酸的改變。不同位點的基因型和等位基因頻率在中外不同豬種的分布都具有品種的特異性。性狀的相關(guān)性分析表明，在藍(lán)塘×長白家系中，不同位點對性能影響表現(xiàn)出不同的作用，而單體型分析表明，ACG單體型豬的生長性狀和產(chǎn)肉性狀優(yōu)于CTG單體型，如：中后軀瘦肉重；前、中后三軀骨重等。而CTG型豬的pH值和系水力卻優(yōu)于ACG單體型

4、，結(jié)合目前的QTL研究，可以將IGFBP-1基因看成是生長發(fā)育性狀的一個候選基因。 2.采用放射雜種板(RHpanel)技術(shù)，將IGFBP-2基因定位于SSC15q22-23上，分別與微衛(wèi)星SW120、SW1683和SW2083連鎖；采用PCR-SSCP技術(shù)，在C502T、A603G和T1218G發(fā)現(xiàn)三個SNP；相關(guān)性分析表明，不同單體型對生長發(fā)育性狀和肉質(zhì)狀都存在影響，其中CAG單體型豬的前后軀重、前后肢重和體長都高于TGT單

5、體型，但肉質(zhì)性狀如肉色和大理石紋正相反。結(jié)合QTL的相關(guān)研究，我們可以認(rèn)為IGFBP-2基因是影響豬肉質(zhì)性狀的候選基因。 3.在IGFBP-3基因中檢測到了三個SNP，分別位于G577T、G897T-G903A-C911T(連鎖突變)和C1371A處。性狀的相關(guān)性分析表明，不同單體型對所檢測的性狀存在普遍的相關(guān)性。在產(chǎn)肉性狀中，CGGCT單體型明顯高于其它單體型，而CGGCG單體型相對較低；生長性能也具有相同的趨勢，以CGGCT

6、單體型的最高；但肉質(zhì)性狀(肉色和SKF肉色)則是ATATT單體型高于CGGCG單體型。結(jié)合QTL和生理生化的相關(guān)研究，可以認(rèn)為IGFBP-3基因是生長發(fā)育性狀的候選基因。 4.采用熒光原位雜交(FISH)和RHpanel技術(shù)，將1GFBP-4基因定位于SSC12q21-24上。采用PCR-SSCP技術(shù)，在A868G-T871A處發(fā)現(xiàn)一個SNP(連鎖突變)，其中A868G的突變會引起氨基酸由谷氨酰胺突變?yōu)榫彼?Q→R)；相關(guān)性分

7、析表明，在藍(lán)塘×長白和金華×皮特蘭兩個家系中，不同基因與體長都存在相關(guān)性，以AA基因型豬的最長，同時還對其它生長性狀存在相關(guān)性；另外，不同基因型還對肉色、大理石紋、眼肌pH值產(chǎn)生影響。結(jié)合QTL的研究，可以將IGFBP-4看成是影響肉質(zhì)性狀的候選基因。 5.采用PCR-SSCP技術(shù)在IGFBP-5基因中檢測到2個SNP，分別位于T199C和G485A處，T199C的突變位外顯子2處，會引起亮氨酸突變?yōu)榻z氨酸(L→S)。相關(guān)性分析

8、表明，在藍(lán)塘×長白和金華×皮特蘭兩個家系中，T199C的突變都會對肌肉的pH值產(chǎn)生影響；而G485A的突變在金華皮特蘭家系中，主要影響肉質(zhì)性狀，如pH值，L，a和h值。單體型分析表明，在藍(lán)塘長白家系中，不同單體型主要影響產(chǎn)肉性能；而在另外的家系中，不同單體型主要影響肌肉品質(zhì)。結(jié)合QTL方面的研究，可以將IGFBP-5基因看成是影響肌肉品質(zhì)特別是肌肉pH值的候選基因。 6.采用RHpanel技術(shù)，將IGFBP-6基因定位于SSC5

9、p11-12上；染色體步移法發(fā)現(xiàn)豬IGFBP-6基因全長4026bp，由4個外顯子組成(分別是371、146、120和322bp)，IGFBPs的基序為“GCAEAGGC”。采用PCR-SSCP技術(shù)在G3079A和T4069G處檢測到兩個SNP；相關(guān)性分析表明，AT單體型豬的生長發(fā)育性狀和產(chǎn)肉性狀都高于GG單體型，但在板油重的指標(biāo)上正好相反。雖然目前人們對于IGFBP-6的研究不多，但根據(jù)本研究的結(jié)果，可以認(rèn)為IGFBP-6是豬生長發(fā)育