山羊脂肪間充質(zhì)干細胞的體外分離培養(yǎng)與定向分化.pdf

1、脂肪間充質(zhì)干細胞(adipose-derived stromal cells,ADSCs)在不同種類的動物細胞中越來越受到人們的關(guān)注。雖然從實驗動物(如大鼠)脂肪組織中已經(jīng)分離出大量脂肪間充質(zhì)干細胞并進行了相關(guān)的研究,但對于家畜的脂肪間充質(zhì)干細胞(如山羊)卻研究的很少。
　　 為了分離和培養(yǎng)山羊脂肪間充質(zhì)干細胞,本實驗借鑒分離大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的方法體外分離培養(yǎng)山羊脂肪間充質(zhì)干細胞、進行定向誘導(dǎo)培養(yǎng)并與大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞進行

2、比較。結(jié)果本實驗分離得到的山羊脂肪間充質(zhì)干細胞在體外增殖穩(wěn)定,經(jīng)過多次傳代后染色體仍保持正常的二倍性,但在相同接種密度和培養(yǎng)條件下,山羊脂肪間充質(zhì)干細胞比大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞分裂增殖速度更快。山羊和大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞經(jīng)CD49d和CD13染色呈陽性,CD34、CD106呈陰性,RT-PCR顯示CD44表達呈陽性；成骨誘導(dǎo)后經(jīng)茜素紅染色后均可見明顯的骨結(jié)節(jié)、ALP染色后細胞均呈陽性且表達Osteocalcin；不同的是山羊脂肪間充質(zhì)干細

3、胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)后形成的骨化結(jié)比大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞經(jīng)誘導(dǎo)后形成的骨化結(jié)大且ALP染色更深。兩種細胞成脂誘導(dǎo)后經(jīng)O-油紅染色后均有紅色脂滴出現(xiàn)在細胞周圍且表達PPARγ2,不同的是山羊脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)后形成的脂滴比大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)后形成的脂滴多且大。應(yīng)用貼壁培養(yǎng)法、三維培養(yǎng)法和懸滴培養(yǎng)法對兩種細胞進行成軟骨誘導(dǎo),誘導(dǎo)后經(jīng)阿新藍染色均有軟骨陷窩形成且表達COL2A1,不同的是在大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞軟骨分化誘導(dǎo)實驗中,懸滴培養(yǎng)法誘導(dǎo)