微囊藻毒素降解菌的篩選鑒定及其對藻毒素MC-LR的降解.pdf

1、針對近年來微囊藻毒素(MCs)的全球性污染問題，本研究以藍藻爆發(fā)較嚴重和頻繁的巢湖為研究對象，對其進行了較為詳細的研究。本文以MCs為唯一碳氮源，采用富集馴化培養(yǎng)的辦法，從巢湖藍藻爆發(fā)的底泥中分離篩選MCs降解菌，同時對篩選出的MCs降解菌進行鑒定，主要通過形態(tài)觀察、生理生化實驗以及16S rDNA序列分析來確定其分類學地位，為巢湖的藻毒素污染的微生物降解治理提供有效地菌源。本研究從巢湖底泥中分離純化出一株MCs降解菌株M6，其16S

2、rDNA的長度為1408bp，經(jīng)鑒定該降解菌株M6為蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)。
　　 為了進一步優(yōu)化該降解菌株M6的降解效果，本研究以MCs為唯一的碳源和氮源，分別從不同的外加碳源和氮源，pH值，接種量，MCs的初始濃度等方面，考察這些因素對降解菌株M6降解MC-LR效果的影響，并初步確定該降解反應的最適環(huán)境條件。結(jié)果表明外加碳源甘油可大幅促進降解菌株M6的生長及其對MC-LR的降解效率，降解率可達到66.

3、2％；外加氮源硝酸銨可以促進降解菌株M6對MC-LR的降解效率；菌株在pH值為7.0-8.0時，菌株的生長狀況良好，并且對MC-LR的降解效率都比較高，當培養(yǎng)基中的pH值為8.0時，MC-LR的降解效率達到最大，可達到62.0％；當接種量介于1％-10％時，菌株的生長量及MC-LR的降解效率均隨接種量的增大而增大，降解效率最高可達51.3％；當MC-LR初始濃度在1.95-15.6 mg/L之間時，MC-LR的降解效率隨著MC-LR的初

4、始濃度的增大而逐漸增大，當初始濃度為15.6 mg/L時，MC-LR的降解效率最高為59.2％。
　　 本研究還對降解菌株M6降解MC-LR.的降解機理進行了初步的探究，對降解菌株M6降解MC-LR進行了定位研究，考察MC-LR誘導前后的降解菌M6進行了SDS-PAGE全細胞電泳，確定經(jīng)MC-LR誘導前后胞內(nèi)蛋白質(zhì)的變化，并且從不同pH值，接種量，MCs的初始濃度等方面，考察這些因素對降解菌株M6胞內(nèi)粗酶液降解MC-LR的影響。

5、結(jié)果表明，降解菌M6降解MC-LR的活性物質(zhì)位于細胞內(nèi)，屬于胞內(nèi)酶，SDS-PAGE全細胞電泳發(fā)現(xiàn)至少有三種酶參與了MC-LR的降解過程，而且實驗表明這三種酶為降解菌本身的組織酶而不是誘導酶。當反應體系中胞內(nèi)粗酶液濃度達到404.9 mg/L，MC-LR的初始濃度為10mg/L，pH為8.0,時，MC-LR的降解率達到最高，16 h降解率可達98.7％。同時本研究還在不同條件下對降解菌株M6進行培養(yǎng)，提取粗酶液并降解一定量的MC-LR，