不同地理種群桑天牛遺傳多樣性研究.pdf

1、本文運(yùn)用AFLP分子標(biāo)記測(cè)定了6個(gè)地理種群桑天牛的遺傳多樣性,建立了基于桑天牛Apriona germari基因組的AFLP最佳反應(yīng)體系,并對(duì)不同地理種群的桑天牛遺傳基因進(jìn)行酶切、連接、擴(kuò)增、電泳等,利用PopGen32軟件來(lái)揭示其遺傳多樣性,旨在揭示桑天牛種群的遺傳結(jié)構(gòu),為桑天牛的蟲(chóng)害防治提供科學(xué)依據(jù)。本研究不僅可以揭示桑天牛不同種群間的遺傳關(guān)系,而且還可以為探討桑天牛各主要危害區(qū)的蟲(chóng)源關(guān)系、發(fā)生機(jī)理等提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)為改善和提高桑

2、天牛的預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)和監(jiān)控技術(shù)水平以及遺傳控制策略提供借鑒意義。研究結(jié)果如下:
　　 ①建立適合的AFLP反應(yīng)體系研究桑樹(shù)主要害蟲(chóng)桑天牛種群的遺傳多樣性,有助于從分子水平分析害蟲(chóng)的系統(tǒng)發(fā)育和開(kāi)辟害蟲(chóng)防治新途徑。對(duì)提取的桑天牛成蟲(chóng)基因組DNA預(yù)擴(kuò)增中的Mg2+濃度、dNTP濃度、引物濃度、Taq DNA聚合酶的酶用量以及選擇性擴(kuò)增中的預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋倍數(shù)、dNTP濃度、引物濃度、Mg2+濃度和Taq DNA聚合酶的酶用量等進(jìn)行單因素試驗(yàn),

3、優(yōu)化反應(yīng)體系。確定預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)體系中的Mg2+濃度為15.0×10-4mol／L、dNTP濃度為15.0×10-5 mol／L、引物濃度為10×10-7 mol／L、Taq酶用量為1 U；選擇性擴(kuò)增反應(yīng)體系中的預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋倍數(shù)為40倍,dNTP濃度為15.0×10-5 mol／L、引物濃度為5.0×10-7 mol／L、Mg2+濃度為15.0×10-4 mol／L、Taq酶用量為1 U。用優(yōu)化后的反應(yīng)體系擴(kuò)增得到了條帶清晰的桑天牛AFL

4、P圖譜。
　　 ②采用AFLP技術(shù),對(duì)6個(gè)桑天牛地理種群DNA進(jìn)行擴(kuò)增,5對(duì)引物組合共得到擴(kuò)增條帶數(shù)241條,其中多態(tài)性條帶數(shù)196條,平均多態(tài)性位點(diǎn)比率為81.33％,其中杭州種群具有13條特異條帶。遺傳距離分析結(jié)果是:來(lái)自河北省的4個(gè)地理種群?jiǎn)柕钠骄z傳距離為0.2703；浙江杭州種群與河南濟(jì)源種群之間的遺傳距離為0.3972,二者與河北省4個(gè)地理種群間的平均遺傳距離分別為0.4182、0.3334。聚類(lèi)分析也顯示,地理上相